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021-54845833/15800441009
基本信息
細胞名稱 ：人乳腺癌細胞 ; AU565
細胞品牌 ：通蔚生物
細胞規(guī)格 ：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
細胞英文 ：AU-565 ; AU 565
基本形態(tài) ：上皮細胞樣
傳代方法 ：1 : 2傳代
培養(yǎng)條件 ：氣相：空氣，95%；CO2,5% ；溫度：37℃
生長特性 ：貼壁生長
消化時間 ：2-3分鐘左右
凍存條件 ：無血清細胞凍存液
完全培養(yǎng)基 ：RPMI1640+10%FBS+1%P/S AU565完全培養(yǎng)基
培養(yǎng)環(huán)境 ：37℃，5%CO2，95%AIR
供應范圍 ：僅供科研使用
特征特性 ：AU565細胞系是在奧克蘭海軍生物科學實驗室從一名乳腺癌患者的胸腔積液中提取的。該細胞系與SK-BR-3 (ATCC HTB-30)來自同一患者。
特征特性 ：AU565細胞系是在奧克蘭海軍生物科學實驗室從一名乳腺癌患者的胸腔積液中提取的。該細胞系與SK-BR-3 (ATCC HTB-30)來自同一患者。
到貨處理
1、收到細胞后，檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發(fā)等問題，請即時聯(lián)系。
2、將細胞取出轉移至液氮或－80 度冰箱保存，建議盡早復蘇。
3、復蘇第一管如有活性狀態(tài)問題及時與我們聯(lián)系，會有技術人員與您溝通指導后再復蘇第二管。
特別說明：未與我方聯(lián)系擅自復蘇第二管出現(xiàn)問題不予售后。
細胞復蘇
1、從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁。
2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。
3、棄上清，沉淀用 5ml 完全培養(yǎng)基重懸，接種 T25 培養(yǎng)瓶，于 37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4、第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
細胞傳代
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次。
2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。
3、棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代（兩個 T25），補充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，放入 37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細胞凍存
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次。
2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。
3、棄上清，沉淀細胞加入 1ml/支的無血清凍存液，混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液）
4、將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉入液氮罐中，需在-80℃冰箱存放 24 小時以上。
T25細胞到貨處理
觀察
收到細胞后，請及時核對培養(yǎng)瓶上標注的細胞名稱是否與訂購的細胞名稱一致以及培養(yǎng)瓶是否有破損或漏液等異常情況。
處理
1、75%酒精棉球擦拭 T25 細胞培養(yǎng)瓶外部。
2、顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（40x,100x,200x 各一張）前三天照片為重要售后依據(jù)，不提供照片默認收到狀態(tài)良好。
3、不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞放入 37 度培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時后再做處理，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
4、收到細胞后，及時查看說明書是貼壁細胞還是懸浮細胞形態(tài)，并按常規(guī)貼壁或懸浮細胞的傳代方法操作。
貼壁
未超過 80%匯合度時，將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，留 5ml 完全培養(yǎng)基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng)；超過 80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。首次傳代，建議 1:2 傳代兩個 T25，傳代時建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基，進行對比培養(yǎng)。
細胞注意事項
個別細胞貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生細胞脫落，這是正?，F(xiàn)象。
請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm 離心 5min，收集上清（后期對比培養(yǎng)使用），沉淀加入胰酶 1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化 1-2 分鐘后，加 5ml 完全培養(yǎng)基終止反應。再離心，棄上清，加 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸。然后按 1:2 比例進行分瓶傳代（兩個 T25），補充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，放入37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
注意：如收到密封培養(yǎng)瓶，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)時要將培養(yǎng)瓶蓋子擰松
細胞予重發(fā)
1.細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)。
2.收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。
3.收到細胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)。
4.常溫發(fā)貨細胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨細胞復蘇2天后，絕大多數(shù)細胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)。
5.常溫發(fā)貨的細胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇2天后，出現(xiàn)污染經(jīng)核實后，重發(fā)。
6.細胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)。
細胞不予重發(fā)
1.客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)。
2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。
3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。
4.細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。
5.細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。
6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。
