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氧基抗氧化能力ORAC檢測試劑盒
測定原理
測定意義
氧基抗氧化能力（OxygenRadicalAbsorbance Capacity, ORAC）是一種檢測各種樣品中生物分子抗氧 化能力的經(jīng)典方法。ORAC方法對抗氧化性能的評價具有特異性好、靈敏度高、測定范圍廣，以及適合抗氧 化活性的高通量篩選等優(yōu)點，在天然產(chǎn)物抗氧化提取物中得到越來越多的應(yīng)用，食品及功能食品企業(yè)普遍采用 ORAC作為功能食品的重要評價標(biāo)準(zhǔn)。
測定原理
以熒光素鈉為熒光探針，偶氮類化合物AAPH作為過氧自由基來源，根據(jù)自由基破 壞熒光探針，使熒光強度產(chǎn)生變化，熒光強度的變化大小反映自由基破壞的程度。在抗氧化劑存在時，它可以 抑制由自由基引起的熒光變化，抑制程度反映了它對自由基的抗氧化能力。
需自備的儀器和用品
天平、丙酮、PBS、離心機、烘箱、熒光酶標(biāo)儀、黑色96孔板、勻漿器。
試劑組成和配制
注意
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試劑名稱 |
規(guī)格 |
數(shù)目 |
貯藏 |
備注 |
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提取液 |
液體100mL |
X2 |
4℃ |
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試劑一 |
液體250μL |
x1 |
-20℃,避光 |
臨用前用提取液稀釋100倍，充分混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。用不完的試劑一可以分裝凍存，避免反復(fù)凍融。 |
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試劑二 |
粉劑 |
x1 |
-20℃,避光 |
臨用前，根據(jù)實驗用量自行稱取，稱取19mg加入1mL提取液混勻溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用。 |
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標(biāo)準(zhǔn)品 |
液體500μL |
x1 |
-20℃,避光 |
Trolox (5 mM) ，用不完的標(biāo)準(zhǔn)品可以分裝凍存，避免反復(fù)凍融。 |
注意
正式測定前務(wù)必取 3 - 5 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。
預(yù)實驗的意義
預(yù)實驗的意義
比色法檢測試劑盒預(yù)實驗非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測，以免造成試劑盒和樣本的浪費（比如低表達處理的樣本）；
2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測定；
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；
4、了解實驗過程中可能出現(xiàn)的實驗現(xiàn)象或問題，以便于及時作出調(diào)整；
5、通過3 - 5組預(yù)實驗，判斷試劑盒對于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實驗樣本稀釋比例。
