通蔚生物亮氨酸氨基肽酶(Leucine Aminopeptidase, LAP)測定意義

注 意：正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
LAP 是一類能水解肽鏈 N-末端為亮氨酸的酶，廣泛存在于肝、腎、胰等組織中，尤其以肝臟中含量最為豐富。各類肝病患者因肝細(xì)胞損傷，血清 LAP 的活性均有不同程度的升高，因此，血清 LAP 活性的檢測能從不同側(cè)面反映各種肝病的發(fā)生和發(fā)展。
測定原理：
LAP 分解 L-亮氨酰對硝基苯胺生成對硝基苯胺，后者在 405nm 有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算 LAP 活性。
自備用品：
酶標(biāo)儀/可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96 孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個)：提取液體積(mL)為 1000~5000：1 的比例(建議 2000 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液)，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次)；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰
上待測。
組織：按照組織質(zhì)量(g)：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液)，進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、血清(漿)樣品：直接檢測。
LAP 測定步驟：
1、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 405nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑二轉(zhuǎn)移至試劑一中充分溶解(如較難溶解，可 50℃水浴加熱約 30min 促進(jìn)溶解)；在 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)水浴 10min 以上；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 50μL 樣本和 150μL 試劑一，混勻后立即記錄 405nm 處初始吸光值A(chǔ)1 和 2min 后的吸光值 A2，計算 ΔA=A2-A1。
注意事項：若 ΔA 大于 0.5，需將酶液用提取液稀釋，計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。使 A2-A1 小于 0.5，
上海通蔚實業(yè)有限公司是一家科研和銷售亮氨酸氨基肽酶(Leucine Aminopeptidase, LAP)科學(xué)試劑產(chǎn)品，領(lǐng)域涵蓋化學(xué)、分析化學(xué)、生命科學(xué)和材料科學(xué)等基礎(chǔ)創(chuàng)新領(lǐng)域，助力客戶的研究計劃。公司產(chǎn)品有ELISA試劑盒、細(xì)胞培養(yǎng)、金標(biāo)檢測試劑盒、食品檢測試劑盒、分子生物學(xué)試劑盒、胎牛血清、科研抗體、生物耗材等。