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豬心臟瓣膜內(nèi)皮細(xì)胞
產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 ：豬心臟瓣膜內(nèi)皮細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 ：通蔚生物
組織來源 ：心臟組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介
豬心臟瓣膜內(nèi)皮細(xì)胞分離自心臟瓣膜組織。心臟是脊椎動(dòng)物身體中最重要的一個(gè)器官，主要功能是為血液流動(dòng)提供壓力，把血液運(yùn)行至身體各個(gè)部分。
心臟由心肌構(gòu)成，左心房、左心室、右心房、右心室四個(gè)腔組成。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開，故互不相通，心房與心室之間有瓣膜(房室瓣) ，這些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流。
心臟的作用是推動(dòng)血液流動(dòng)，向器官、組織提供充足的血流量，以供應(yīng)氧和各種營養(yǎng)物質(zhì)，并帶走代謝的終產(chǎn)物(如二氧化碳、無機(jī)鹽、尿素和尿酸等) ，使細(xì)胞維持正常的代謝和功能。心臟瓣膜在心臟永不停止的血液循環(huán)活動(dòng)中扮演的角色即普通又關(guān)鍵：瓣膜相當(dāng)于門衛(wèi)，阻止血液回流于剛剛離開的心室。
在心房與心室之間，在心室與離開心室的血管之間，都有瓣膜。血液流過后，瓣膜就會(huì)合上最常見的瓣膜問題是二尖瓣脫垂，“二尖瓣”這個(gè)詞源自“主教冠”，它是主教戴的帽子，有兩個(gè)尖。位于左心房和左心室之間的瓣膜不能正常閉合。
方法簡介
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的豬心臟瓣膜內(nèi)皮細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的豬心臟瓣膜內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)C D 31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ：PLL(0. 1m g/ml) ，明膠(0. 1%)
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細(xì)胞形態(tài) ：內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 ：可傳2-3代
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣，95% 。C O2，5%
豬心臟瓣膜內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
使用方法
豬心臟瓣膜內(nèi)皮細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈內(nèi)皮細(xì)胞樣，在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代。建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0. 1m g/m l），明膠（0. 1% ），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
