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021-54845833/15800441009
睪酮(T)ELISA試劑盒
簡介
睪酮(Testosterone)，又稱睪丸素、睪丸酮、睪甾酮等，是一種類固醇雄激素，主要由睪丸間質(zhì)細胞產(chǎn)生，其代謝產(chǎn)物有兩種，分別是二氫睪酮和雌二醇。睪酮主要參與精子形成以及第一、第二性征的發(fā)育和維持，除此之外，睪酮同樣參與免疫抑制、骨密度調(diào)節(jié)、血管舒張、突觸可塑性以及前列腺癌和糖尿病等生理病理過程。和其它類固醇類激素相同，睪酮的產(chǎn)生也受到垂體激素的調(diào)控。當受到促性腺激素釋放激素(Gonadotropin Releasing Hormone, GnRH)的刺激后，垂體前葉首先分泌黃體生成素(Luteinizing Hormone, LH)，LH作用于睪丸間質(zhì)細胞膜受體，經(jīng)由cAMP依賴膽固醇合成途徑誘導睪酮合成。本酶聯(lián)免疫檢測試劑盒可以經(jīng)濟、快速地檢測樣品中的睪酮的含量。
檢測原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預包被偶聯(lián)抗原，樣本中睪酮和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭睪酮抗體，加入酶標二抗后，形成包被抗原-抗體-酶標二抗復合物。隨后結(jié)合的酶催化TMB底物顯色，樣本吸光值與其含有的睪酮成負相關。通過標準曲線可準確定量樣品中睪酮的含量。通過標準曲線計算所得值乘以樣品處理的稀釋倍數(shù)即為實際樣品中睪酮的含量。
需要的其他材料
1. 酶標儀，包含450nm測定波長，同時包含600-680nm校正波長更佳；
2. 移液器及槍頭；
3. 蒸餾水或去離子水；
4. 100-1000mL刻度量筒；
5. 洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機；
6. 水平軌道微孔板振蕩器，能夠保持500±50 rpm的速度；
7. 用于稀釋標準品和樣品的試管。
試劑準備
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
洗滌液/稀釋液配置
如果洗滌液/稀釋液（20×）有晶體析出，需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋（例如：1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水）
標準品配置
試劑盒中取出標準品，準備7個試管，先將1000ng/mL標準品（200μL）按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至12500pg/mL（例：12.5μL的標準品母液+987.5μL的1×稀釋液，制備得到1000μL的12500pg/mL濃度標準品），隨后在6個試管中分別加入400μL的1×稀釋液，在這6個單獨的試管中將12500pg/mL標準品依次3倍倍比稀釋至7個梯度，共配制7個濃度的標準品，依次為：12500pg/mL、4167pg/mL、1389pg/mL、463pg/mL、154.32pg/mL、51.44pg/mL、17.15pg/mL，從最高濃度標準品溶液中吸取200μL標準品到下一個試管中，輕輕吹打混勻，以此類推進行標準品的倍比稀釋（如圖所示），1×稀釋液用作零濃度標準品(0pg/mL)。
一抗工作液配置
使用前10分鐘，用1×稀釋液將100×一抗工作液稀釋成1×一抗工作液，根據(jù)所需用量配置。
酶標二抗工作液配置
使用前10分鐘，用1×稀釋液將100×酶標二抗稀釋成1×酶標抗體工作液，根據(jù)所需用量配置。
備 注：如樣本中待測物濃度高于標準品最高值，請根據(jù)實際情況選擇適當?shù)南♂尡稊?shù) (建議：將待測樣本用樣品稀釋液最低稀釋1倍，在正式實驗之前做預實驗，以確定具體稀釋倍數(shù)) ；標準品母液及100×酶標二抗溶液根據(jù)實驗所需酶標板孔數(shù)吸取一定量配制工作液，剩余溶液應放回-20℃儲存，且避免反復凍融。（若實驗在1-2周內(nèi)做完，標準品母液及100×酶標抗體置于2-8℃保存；若實驗為長時間跨度實驗，建議將標準品母液及100×酶標抗體置于-20℃保存，以保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性）
結(jié)果的計算
計算標準品和樣本復孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標準曲線(作圖時去掉空白組的值)?；蛘呤褂媚軌蛏伤膮?shù)邏輯（4-P）曲線擬合的計算機軟件來創(chuàng)建標準曲線。若樣品OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應的稀釋倍數(shù)。
精密度
批內(nèi)精密度 ：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在同一個板塊內(nèi)精度評估。
批內(nèi)變異系數(shù) CV%小于10%。
批間精密度 ：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在不同板塊內(nèi)精度評估。
批間變異系數(shù) CV%小于15%。
回收率
樣本回收率：80% - 120%
靈敏度
經(jīng)樣本測試，本試劑盒的檢測靈敏度為17.15pg/mL。
線性關系
校準品劑量反應曲線相關系數(shù)r值，大于等于0.998。
本ELISA試劑盒實驗計算和曲線圖，請您下載產(chǎn)品說明書(供參考），本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷和治療。
