羥基抗氧化能力HORAC(熒光法)檢測(cè)試劑盒

測(cè)定意義

HORAC測(cè)定填補(bǔ)了傳統(tǒng)抗氧化檢測(cè)方法無(wú)法評(píng)估“預(yù)防性”抗氧化能力的空白，尤其適用于識(shí)別那些通過(guò)螯合金屬離子來(lái)抑制羥自由基生成的物質(zhì)——這正是許多天然多酚類(lèi)抗氧化劑的核心作用機(jī)制。

測(cè)定原理

以熒光素鈉為熒光探針，類(lèi)芬頓反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基，根據(jù)羥自由基破壞熒光探針，使熒光強(qiáng)度產(chǎn)生變化，熒光強(qiáng)度的變化大小反映自由基破壞的程度。在抗氧化劑存在時(shí)，它可以抑制由自由基引起的熒光變化。抑制程度反映了它對(duì)自由基的抗氧化能力。

需自備的儀器和用品

天平、丙酮、離心機(jī)、烘箱、熒光酶標(biāo)儀、黑色96孔板、勻漿器。

試劑組成和配制

試劑名稱	規(guī)格	數(shù)目	貯藏
提取液	液體100mL	X2	4℃
試劑一	液體500μL	x1	-20℃,避光	臨用前用提取液稀釋100倍充分混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。用不完的試劑一分裝凍存避免反復(fù)凍融。
試劑二	液體500μL	x1	-20℃,避光	臨用前取出243μL與757μL蒸餾水充分混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配，不可保存。
試劑三	粉劑	X2	-20℃,避光	臨用前加入2mL蒸餾水充分溶解，現(xiàn)用現(xiàn)配。
標(biāo)準(zhǔn)品	粉劑	X1	-20℃,避光	沒(méi)食子酸（臨用前稱取1.7271mg加入10mL提取液充分溶解即為1000μmol/L）現(xiàn)用現(xiàn)配，不可保存。

注意

正式測(cè)定前務(wù)必取 3 - 5 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義

比色法檢測(cè)試劑盒預(yù)實(shí)驗(yàn)非常重要

1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測(cè)，以免造成試劑盒和樣本的浪費(fèi)（比如低表達(dá)處理的樣本）；

2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測(cè)定；

3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；

4、了解實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象或問(wèn)題，以便于及時(shí)作出調(diào)整；

5、通過(guò)3 - 5組預(yù)實(shí)驗(yàn)，判斷試劑盒對(duì)于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)樣本稀釋比例。

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