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肌酸激酶活性檢測(cè)試劑盒48樣
測(cè)定意義
測(cè)定意義
肌酸激酶（CK）主要存在于心臟、肌肉以及腦等組織中，可逆地催化肌酸與ATP之間的轉(zhuǎn)磷?；磻?yīng)，是一個(gè)與細(xì)胞能量運(yùn)轉(zhuǎn)、肌肉收縮、ATP再生等有直接關(guān)系的重要激酶。
測(cè)定原理
肌酸激酶能夠催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，己糖激酶（Hexokinase）催化ATP和葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH，NADPH在340 nm有特征吸收峰，通過測(cè)定340 nm處吸光值變化即可表征肌酸激酶的活性。
需自備的儀器和用品
酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96UV孔板、研缽、水浴鍋和蒸餾水。
測(cè)定操作
測(cè)定操作
1、酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)溫度至37℃，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、試劑二37℃預(yù)熱10min。
3、在96孔UV板中依次加入：
注意
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試劑名稱(μL） |
測(cè)定管 |
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樣本 |
10 |
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試劑一 |
200 |
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混勻，37℃孵育5min |
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試劑二（已預(yù)熱10min） |
20 |
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混勻，記錄37℃，340nm下10s時(shí)的吸光值A(chǔ)1和5min10s時(shí)的吸光值A(chǔ)2。計(jì)算ΔA＝A2-A1 |
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注意
如果ΔA小于0.05，可延長反應(yīng)時(shí)間或增加樣本量。如果ΔA大于0.8，可將樣本待測(cè)液用提取液稀釋后測(cè)定，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
比色法檢測(cè)試劑盒預(yù)實(shí)驗(yàn)非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測(cè)，以免造成試劑盒和樣本的浪費(fèi)（比如低表達(dá)處理的樣本）；
2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測(cè)定；
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；
4、了解實(shí)驗(yàn)過程中可能出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象或問題，以便于及時(shí)作出調(diào)整；
5、通過3 - 5組預(yù)實(shí)驗(yàn)，判斷試劑盒對(duì)于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)樣本稀釋比例。
