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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
產(chǎn)品名稱(chēng) ：人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 ：通蔚生物
組織來(lái)源 ：皮膚組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡(jiǎn)介
人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞分離自皮膚組織。表皮位于動(dòng)物皮膚的外層，由胚胎時(shí)期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu)，由復(fù)層扁平上皮構(gòu)成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質(zhì)層。表皮角質(zhì)形成細(xì)胞是一種能合成角質(zhì)蛋白的上皮細(xì)胞，此類(lèi)細(xì)胞為表皮的主體，由表皮深層始逐漸增殖、分化，并在成為角化的角質(zhì)細(xì)胞中，細(xì)胞核與細(xì)胞器完全消失，細(xì)胞亦失去生理功能而脫落。
未脫落部分對(duì)機(jī)體尚有保護(hù)作用，故不必在洗擦身體時(shí)用力搓擦，使其過(guò)早脫失。表皮角質(zhì)形成細(xì)胞主要分布于表皮基底層，在上皮程序性死亡后，細(xì)胞產(chǎn)生角化并移向表皮。體外培養(yǎng)的表皮角化細(xì)胞容易導(dǎo)致終末分化，不能充分增殖。角質(zhì)形成細(xì)胞最終產(chǎn)生角質(zhì)蛋白，在其向角質(zhì)細(xì)胞演變過(guò)程中，一般可以分為四層，即基底層、棘層、顆粒層以及角質(zhì)層。有人把前三層或前二層稱(chēng)為生發(fā)層或馬爾匹基層。此外，在某些部位，特別在掌跖部位，角質(zhì)層下方還可見(jiàn)到透明層。
方法簡(jiǎn)介
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的人表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-膠原酶混合消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶 。
質(zhì)量檢測(cè)
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞經(jīng)PC K 免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ：鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm 2)
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 ：貼壁
細(xì)胞形態(tài) ：上皮細(xì)胞樣
傳代特性 ：可傳2-3代
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣，95% 。C O2，5%
人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
使用方法
人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈上皮細(xì)胞樣，在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代。建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴(lài)氨酸PLL（0. 1m g/m l），明膠（0. 1% ），依據(jù)細(xì)胞種類(lèi)而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決。
