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肝肌糖原含量檢測(cè)試劑盒
測(cè)定意義
糖原是由葡萄糖單位構(gòu)成的高分子多糖，是糖的主要的儲(chǔ)存形式之一，主要貯存在肝和肌肉中作為備用能量，分別稱為肝糖原和肌糖原。肝糖原可調(diào)節(jié)血糖濃度，當(dāng)血糖升高時(shí)可在肝臟合成糖原，血糖降低時(shí)，肝糖原則分解為葡萄糖以補(bǔ)充血糖。因此，肝糖原對(duì)維持血糖的相對(duì)平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的儲(chǔ)存形式,在劇烈運(yùn)動(dòng)消耗大量血糖時(shí)，肌糖原不能直接分解成血糖，必須先分解產(chǎn)生乳酸,隨血液循環(huán)到肝臟,通過(guò)糖異生轉(zhuǎn)變?yōu)楦翁窃蚱咸烟恰?/span>
測(cè)定原理
蒽酮法。利用強(qiáng)堿性提取液提取糖原，在強(qiáng)酸性條件下利用蒽酮顯色劑測(cè)定糖原含量。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、濃硫酸（不允許快遞）和蒸餾水。
測(cè)定步驟
測(cè)定步驟
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至620nm，蒸餾水調(diào)零。
2、調(diào)節(jié)水浴鍋至95℃。
3、試劑二工作液的配制：在試劑二中倒入6mL蒸餾水，緩慢倒入24mL濃硫酸，充分溶解混勻后使用；用不完的試劑4℃保存一周；
4、加樣表（在EP管中反應(yīng)）：
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
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試劑（μL） |
空白管 |
標(biāo)準(zhǔn)管 |
測(cè)定管 |
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待測(cè)樣本 |
- |
- |
60 |
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試劑一 |
- |
60 |
- |
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蒸餾水 |
60 |
- |
- |
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試劑二工作液 |
240 |
240 |
240 |
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混勻，置95℃水浴10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻，取200μL轉(zhuǎn)移至微量石英比色皿或96孔板中，于620nm波長(zhǎng)處，分別讀取空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管吸光度，分別記為A1、A2和A3。 |
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預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
比色法檢測(cè)試劑盒預(yù)實(shí)驗(yàn)非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測(cè)，以免造成試劑盒和樣本的浪費(fèi)（比如低表達(dá)處理的樣本）；
2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測(cè)定；
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；
4、了解實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象或問(wèn)題，以便于及時(shí)作出調(diào)整；
5、通過(guò)3 - 5組預(yù)實(shí)驗(yàn)，判斷試劑盒對(duì)于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)樣本稀釋比例。
注意
注意
正式測(cè)定前務(wù)必取 3 - 5 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
