土壤β-葡萄糖苷酶檢測試劑盒
測定意義
測定意義
土壤β-葡萄糖苷酶能夠催化水解芳基或烴基與糖基原子團(tuán)之間的糖苷鍵生成葡萄糖,是纖 維素分解酶系中重要組成成分之一,在土壤微生物的糖類代謝方面具有重要生理功能。
測定原理
S-BGL分解4-MUF-β-D葡糖苷生成熒光產(chǎn)物,通過測定熒光值升高速率來計(jì)算S-BGL活性。
自備用品
酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、黑色96孔板和蒸餾水。
測定步驟
測定步驟
1、熒光酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,設(shè)置激發(fā)光波長 355 nm,測定波長 450nm。
2、加樣表
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
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試劑名稱 |
測定管 |
空白管 |
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震蕩條件下取勻待測液(μL) |
200 |
- |
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蒸餾水(μL) |
- |
200 |
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試劑二(μL) |
200 |
200 |
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混勻, 30℃避光振蕩反應(yīng)3h后, 3000g 4℃離心3min,取上清液200μL于黑色96孔板中,檢測熒光值,激發(fā)波長355nm,發(fā)射波長450nm。熒光值分別為A測定管,A空白管,計(jì)算ΔA=A測定管-A空白管。 |
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預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
比色法檢測試劑盒預(yù)實(shí)驗(yàn)非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測,以免造成試劑盒和樣本的浪費(fèi)(比如低表達(dá)處理的樣本);
2、熟悉生化試劑盒的操作流程,尤其是初次使用生化試劑盒測定;
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適;
4、了解實(shí)驗(yàn)過程中可能出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象或問題,以便于及時(shí)作出調(diào)整;
5、通過3 - 5組預(yù)實(shí)驗(yàn),判斷試劑盒對于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍,指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)樣本稀釋比例。
注意
注意
正式測定前務(wù)必取 3 - 5 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。
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