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兔脊髓神經(jīng)元細(xì)胞
產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 ： 兔脊髓神經(jīng)元細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 ： 通蔚生物
組織來源 ： 脊髓組織
產(chǎn)品規(guī)格 ： 5×105cells/T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介
兔脊髓神經(jīng)元細(xì)胞分離自脊髓組織；脊髓是細(xì)細(xì)的管束狀的神經(jīng)結(jié)構(gòu)，位于脊柱的椎管內(nèi)且被脊椎保護(hù)；是源自腦的中樞神經(jīng)系統(tǒng)延伸部分。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞依靠復(fù)雜的聯(lián)系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經(jīng)信息。
人和脊椎動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分，在椎管里面，上端連接延髓，兩旁發(fā)出成對的神經(jīng)，分布到四肢、體壁和內(nèi)臟。脊髓的內(nèi)部有一個H 形(蝴蝶型)灰質(zhì)區(qū)，主要由神經(jīng)細(xì)胞構(gòu)成；在灰質(zhì)區(qū)周圍為白質(zhì)區(qū)，主要由有髓神經(jīng)纖維組成；脊髓是許多簡單反射的中樞。
脊髓兩旁發(fā)出許多成對的神經(jīng)(稱為脊神經(jīng))分布到全身皮膚、肌肉和內(nèi)臟器官。脊髓是周圍神經(jīng)與腦之間的通路，也是許多簡單反射活動的低級中樞。按脊神經(jīng)的出入可把脊髓也分為相應(yīng)的31節(jié)，31對脊神經(jīng)就是由不同的脊椎發(fā)出的。神經(jīng)系統(tǒng)最基本的結(jié)構(gòu)和功能單位是神經(jīng)元，即神經(jīng)細(xì)胞，其大小和外觀在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中差異很大。
但都具有胞體和樹突、軸突。胞體又叫核周體，內(nèi)含神經(jīng)絲、微管、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和一個有明顯核仁的核。一些大神經(jīng)元突起的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可用Nissl染色顯示，在光鏡下是灰藍(lán)色斑塊狀，稱為尼氏小體。樹突和軸突是神經(jīng)元的突起，能在神經(jīng)元之間傳遞電沖動，突起的大小和形態(tài)各不相同，很難用常規(guī)的顯微鏡鑒別。
脊髓組織內(nèi)含有大量膠質(zhì)細(xì)胞，神經(jīng)元含量少，分離純化難度大，且脊髓神經(jīng)元細(xì)胞是高度分化的終末細(xì)胞，不能分裂增殖，培養(yǎng)要求高。剛接種的脊髓神經(jīng)元呈圓形，體積小，透亮，無突起。培養(yǎng)2-3d，可見胞體增大，突起增多延長；培養(yǎng)6-7d，細(xì)胞體大飽滿，突起明顯增加延長并交織成網(wǎng)，光暈明顯，立體感強(qiáng)。培養(yǎng)20d后，死 亡細(xì)胞明顯增加，細(xì)胞出現(xiàn)內(nèi)空泡，突起粗細(xì)不均，甚至脫壁，發(fā)生細(xì)胞崩解。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的兔脊髓神經(jīng)元細(xì)胞采用膠原酶-胰酶聯(lián)合消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶 。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實驗室分離的兔脊髓神經(jīng)元細(xì)胞經(jīng)β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ： 含B-27 Supplem ent、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 貼壁
細(xì)胞形態(tài) ： 神經(jīng)元細(xì)胞樣
傳代特性 ： 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群
傳代比例 ： 不傳代
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
兔脊髓神經(jīng)元細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細(xì)胞電子版照片
使用方法
兔脊髓神經(jīng)元細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈神經(jīng)元細(xì)胞樣，在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實驗。客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1.取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2.靜置后，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，拍照記錄細(xì)胞的貼壁情況，漂浮的細(xì)胞需離心收集后在離心管消化(脫落細(xì)胞處理方式)，貼壁細(xì)胞也需消化后與脫落的細(xì)胞合并一起后重新接種。
3.神經(jīng)元細(xì)胞消化
1) 將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，離心收集細(xì)胞(1200rpm5min)，細(xì)胞沉淀按照下面脫落細(xì)胞處理方式處理該部分細(xì)胞。
2) 培養(yǎng)瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞，用PBS(37℃預(yù)熱)清洗細(xì)胞一次，將PBS收集到步驟1的離心管中，
不要直接丟棄。
3) 添加0.125% 胰蛋白酶消化液(0.25% 胰酶用PBS稀釋一倍)1m L至培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，放入4℃冰箱消化細(xì)胞3-5min(或者37℃溫浴1min )。
4) 倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化(稀釋法終止消化，培養(yǎng)基用量不低于5ml)。
5)用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞，1200rpm 5min 離心去除殘留胰酶。
6) 去掉上清，加入適量的完全培養(yǎng)基混勻(可補(bǔ)加1% FB S，促進(jìn)貼壁)，接種于孔板中(提前多聚賴氨酸包被孔板)。
7) 待細(xì)胞貼壁后可用于后續(xù)相關(guān)實驗。
4. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液，1200rpm 5min離心，保留沉淀。
2) 添加0.125% 胰蛋白酶消化液(0.25% 胰酶用PBS稀釋一倍)1m L至離心管中，輕柔重懸沉淀，放置4℃冰箱靜置3-5min )。
3) 消化完向離心管內(nèi)加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
4) 經(jīng)1200rpm ，離心5min，丟棄上清，用5ml完全培養(yǎng)基(可補(bǔ)加1% FBS，促進(jìn)貼壁)重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
5) 接種后絕對靜置24-48小時， 48小時后觀察，否則細(xì)胞容易聚團(tuán)。
5. 細(xì)胞實驗
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ （2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1m g/ml），明膠（0.1% ），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
