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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 ：人胰腺癌組織源星狀細胞
產(chǎn)品品牌 ：通蔚生物
組織來源 ：胰腺癌組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介
人胰腺癌組織源星狀細胞分離自患有胰腺癌病人的胰腺癌組織。胰腺癌是一種惡性程度很高，診斷和治療都很困難的消化道惡性腫瘤，約90% 為起源于腺管上皮的導管腺癌。其發(fā)病率和死亡率近年來明顯上升。5年生存率< 1% ，是預后最差的惡性腫瘤之一。胰腺癌早期的確診率不高，手術(shù)死亡率較高，而治愈率很低。胰腺癌的病因尚不十分清楚。其發(fā)生與吸煙、飲酒、高脂肪和高蛋白飲食、過量飲用咖啡、環(huán)境污染及遺傳因素有關(guān)。近年來的調(diào)查報告發(fā)現(xiàn)糖尿病人群中胰腺癌的發(fā)病率明顯高于普通人群。
也有人注意到慢性胰腺炎病人與胰腺癌的發(fā)病存在一定關(guān)系，發(fā)現(xiàn)慢性胰腺炎病人發(fā)生胰腺癌的比例明顯增高。另外還有許多因素與此病的發(fā)生有一定關(guān)系，如職業(yè)、環(huán)境、地理等。隨著醫(yī)學技術(shù)的進步，大部分癌癥的生存率都在提高，例如乳腺癌，結(jié)直腸癌等腫瘤，近幾十年來，生存率得到了大幅度的提升。但胰腺癌的生存率一直停滯不前，缺乏有效的治療方法，極高的死亡率使其成為“癌中之王”，近年來胰腺癌微環(huán)境的研究引起了諸多學者的重視。胰腺癌微環(huán)境構(gòu)成復雜，其中，胰腺星狀細胞是胰腺癌微環(huán)境中最重要的間質(zhì)細胞之一，在胰腺癌細胞生長、遷移、侵襲、血管生成、免疫逃逸、轉(zhuǎn)移及化療耐藥中發(fā)揮重要的作用。
因此針對胰腺星狀細胞和胰腺癌細胞相互作用的研究有望提高胰腺癌患者的預后。胰腺星狀細胞(p an creatic stellate cells,PSC )是一種胰腺特異性間質(zhì)細胞，多在胰腺組織內(nèi)血管和導管周圍聚集，環(huán)繞在腺泡的基底部位，正常靜比狀態(tài)下只占胰腺細胞的4% 左右，細胞質(zhì)中含有豐富的維生素A 脂滴，以表達膠質(zhì)纖絲酸性蛋白質(zhì)(glialfilam entacidic protein,G FA P )、結(jié)合蛋白(D esmin)為特征。在胰腺組織損傷、應(yīng)激等條件下PSC 被激活，成為一種肌成纖維細胞，胞質(zhì)中富含維生素A 的脂滴消失，以表達α-平滑肌肌動蛋白(α-sm oothm uscle actin,α -SM A )為標志，能大量合成細胞外基質(zhì)(extracellularm atrix,ECM )和分泌多種細胞因子。
胰腺癌微環(huán)境中存在大量激活的PSC，在胰腺癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。PSC 通過誘導胰腺癌細胞(pancreatic cancercells,PC C )上皮一間質(zhì)轉(zhuǎn)變(epithelial-m esenchym altran sition,EM T)促進胰腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移侵襲和轉(zhuǎn)移是腫瘤細胞脫離原發(fā)腫瘤灶到達靶器官的一個多步驟過程，眾多研究表明EM T與胰腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。EM T最主要的特征是上皮細胞特征丟失同時伴間質(zhì)細胞特征獲得，如E一鈣茹蛋白(E-cadherin)表達下降，波形蛋白(Vim entin )表達上調(diào)。karn evi等研究發(fā)現(xiàn)，PSC 與PC C 共培養(yǎng)后能夠誘導PC C 上皮性細胞標志(E-cadherin,β -catenin)丟失，促進間質(zhì)性細胞標志(Vim entin,Snai-1）獲得，表明PSC 在PC C 的EM T 形成過程中發(fā)揮了重要的作用。
PSC 參與胰腺癌進展的各個環(huán)節(jié)，而PSC 活化是PSC 發(fā)揮功能的重要部分。因此，如能抑制PSC 活化或控制PSC 細胞功能將為胰腺癌綜合治療提供潛在的治療策略。因此，隨著針對抑制PSC活化或其功能的研究的深入，有望從胰腺癌微環(huán)境角度切實提高胰腺癌的綜合治療效果。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的人胰腺癌組織源星狀細胞采用膠原酶消化法結(jié)合密度梯度離心法制備而來制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實驗室分離的人胰腺癌組織源星狀細胞經(jīng)α-SM A 免疫熒光鑒定，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS、EG F、Insulin、Penicillin、Streptom ycin等
生長特性 ：貼壁
細胞形態(tài) ：成纖維細胞樣
傳代特性 ：可傳2-3代
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ：氣相：空氣，95% 。C O2，5%
人胰腺癌組織源星狀細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
使用方法
人胰腺癌組織源星狀細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈成纖維細胞樣，在通蔚生物技術(shù)部標準操作流程下，細胞可傳2-3代。建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1）吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS（37℃預熱）清洗細胞一次。
2）添加0. 25% 胰蛋白酶消化液0. 5m L至培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，37℃溫浴1min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3）用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4）待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基（37℃預熱）。
3. 復蘇操作說明
1. 準備好37度水浴鍋，預熱至37度。
2. 準備好T25培養(yǎng)瓶，加入10ml完全培養(yǎng)基（培養(yǎng)基量必須大于凍存液10倍體積）。
3. 取出干冰內(nèi)凍存細胞管，用EP手套包裹凍存管（防止管內(nèi)進水導致污染），迅速放于水
浴鍋內(nèi)，于1min內(nèi)融化完全。
4. 取出凍存管，酒精噴灑消毒后擦干，置于超凈臺內(nèi)。
5. 吸取凍存管內(nèi)細胞懸液，加入步驟2中準備好的T25培養(yǎng)瓶內(nèi)，8字緩慢搖勻。
6. 培養(yǎng)瓶放于37度C O 2恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，靜置培養(yǎng)24h，更換新鮮換培養(yǎng)基（注意貼壁細胞、懸浮細胞不同換液操作方法）。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0. 1m g/m l），明膠（0. 1% ），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
