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021-54845833/15800441009
基本信息
產(chǎn)品品牌 ：通蔚生物
中文名稱 ：小鼠成纖維細胞
細胞簡稱 ： PA 317
細胞形態(tài) ： 成纖維細胞樣
生長特性 ： 貼壁細胞
培養(yǎng)環(huán)境 ： 空氣，95% ；CO2，5% 37℃
凍存條件 ： 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40% FBS+5% D M SO液氮
完全培養(yǎng)基 ： DM EM (PM 150210)＋10% F B S(164210-50)＋1% P /S(P B 180120)
傳代步驟
1、吸出原培養(yǎng)液。
2、加入2ml左右PBS，輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞,吸出PBS丟棄。
3、加入1ml左右0.25% 胰蛋白酶溶液（含ED TA ），輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細胞。
4、放入培養(yǎng)箱消化，顯微鏡下看到細胞塊中間的細胞明顯變圓有間隙時可終止，全程不要拍打培養(yǎng)瓶。
5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，吹打細胞使之脫壁并在液體里反復吹打使細胞盡量呈單顆細胞的懸浮液。
6、收集細胞懸液離心，1200rpm /min 3分鐘，離心完吸出上清丟棄。
7、加入新鮮培養(yǎng)基，吹打幾下混勻細胞即可，按比例接種到新培養(yǎng)瓶，補足培養(yǎng)基，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進行培養(yǎng)。
傳代比例（密度） ： 1:3-1:4
換液頻次 ： 2~ 3次/周
細胞背景描述
PA 317細胞源自TK -N IH /3T3細胞，通過pBR322中的包裝結(jié)構(gòu)D N A (pPAM 3)和pBR322中的單純皰疹病毒胸苷激酶基因共同轉(zhuǎn)染構(gòu)建而成。通過感染或轉(zhuǎn)染將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導入這些細胞，結(jié)果生成可以感染許多哺乳動物細胞的雙嗜性載體顆粒。PA317細胞生成的病毒顆粒已成功地用于將基因?qū)肴祟悾赡芤驗橛糜跇?gòu)建PA317細胞而轉(zhuǎn)入的D N A 丟失，能夠包裝逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的PA 317細胞百分比隨傳代而減少。在含0.03m M 次黃嘌呤、0.001m M 氨甲喋呤和0.02m M 胸苷的培養(yǎng)基中短暫(大約5天)選擇，可以選出保留了包裝功能的細胞。選擇后，PA 317細胞應(yīng)在H T培養(yǎng)基(0.03m M 次黃嘌呤、0.02m M 胸苷)中培養(yǎng)4天，以稀釋殘留的氨甲喋呤，此后PA317細胞不需選擇可以穩(wěn)定至少1個月。
供體年齡 ： 胚胎
組織來源 ： 胚胎
細胞類型 ： 轉(zhuǎn)化細胞系
生物安全等級 ： 1
細胞保藏中心 ： ATCC ; C RL-9078EC AC C ; 89032007
收到常溫細胞后如何處理
細胞培養(yǎng)詳細操作步驟請參照通蔚生物細胞培養(yǎng)操作指南
1. 收到常溫細胞后，及時拍照記錄有無漏液/瓶身破損現(xiàn)象。
2. 用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4. 靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片 將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5. 若觀察到異常或者對細胞有疑問，請及時跟我們聯(lián)系；對于細胞培養(yǎng)操作及培養(yǎng)。可跟我們的技術(shù)支持交流。
