弧菌通用PCR試劑盒

產(chǎn)品及特點：

弧菌（Vibrio spp.）是菌體短小，彎曲成弧形，尾部帶一鞭毛的革蘭氏陰性菌。弧菌屬廣泛分布于河口、海灣、近岸海域的海水和海洋動物體內(nèi)。該菌引起的食物中毒經(jīng)烹飪不當(dāng)?shù)暮．a(chǎn)品或鹽腌制品所傳播。常見的為海蟄、海魚、海蝦及各種貝類，因食物容器或砧板生熟不分污染本菌后，也可發(fā)生食物中毒。該菌常年均可發(fā)生，可從自限性腹瀉至中度霍亂樣病癥，有腹痛、腹瀉、嘔吐和低熱，糞便多為水樣，少數(shù)為血水樣，恢復(fù)較快，病后免疫力不強，可重復(fù)感染，該菌還可引起淺表創(chuàng)傷感染、敗血癥等，給人體健康帶來嚴重損害，因此弧菌檢測具有重要的意義。本試劑盒根據(jù)熒光定量PCR原理開發(fā)，

1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增弧菌通用，與其他病原沒有交叉反應(yīng)。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。

規(guī)格及成分：

編號	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃色）
試劑三	弧菌通用PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	弧菌通用PCR 陽性對照（1×10E8/μL）	50 μL（黃蓋）
試劑五	使用手冊	1 份

運輸及保存：

低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試劑。

自備試劑：

樣品 DNA。

使用方法：

一、樣品 DNA 的制備：

1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。

2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 弧菌通用 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)：

3. 對N+2個樣品，在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照，故需要設(shè)置N+4個反應(yīng)。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：

成份	N+2 個樣品管	PCR 陰性對照	PCR陽性對照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
弧菌通用PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2個樣品DNA模板	各18μL	--	--
PCR 陰性對照（水）	--	18μL	--
PCR 陽性對照（弧菌通用PCR陽性對照1000倍稀釋液）	18μL	18μL	18μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過程	溫度	時間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng)35個循環(huán)	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測：

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。

四、特別提示：

本公司的所有產(chǎn)品，僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

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