產品及特點：
庚型肝炎病毒(Hepatitis G Virus，HGV)會引發(fā)肝炎，和乙型肝炎病毒相似，主要經輸血等非腸道途徑傳播，也可存在母-嬰傳播和醫(yī)源性傳播。單獨感染時臨床癥狀不明顯，一般不損害肝臟。主要特征有：過性病毒血癥呈隱性感染；急性肝炎 ALT 升高，黃疸比急性丙肝輕，多數(shù)很快恢復可與乙、丙肝病毒合并感染；病毒持續(xù)存在病毒始終處于低滴度狀態(tài)，少數(shù)高滴變，但常無臨床癥狀；病情遷延隨著病毒滴度的波動，ALT 間歇性增高，少數(shù)反復發(fā)作轉成慢性肝炎；可能引起暴發(fā)性肝炎以亞急性重型肝炎多見；肝硬化感染病毒后演變成肝硬化需較長時間，一旦硬化，病情即急轉直下，發(fā)展迅速；肝癌少數(shù)換者也可發(fā)展成肝癌，與乙、丙肝病毒有協(xié)同作用。該病毒對人體生命健康造成嚴重損害，因此快速靈敏檢測庚型肝炎病毒具有重要意義。
本產品就是以探針法熒光定量 PCR 技術為基礎開發(fā)的專門檢測庚型肝炎病毒的試劑盒。
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 引物和探針經過優(yōu)化，靈敏性高。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)庚型肝炎病毒高度保守區(qū)設計，不會跟其他病毒 DNA發(fā)生交叉反應。
5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應。
規(guī)格及成分：
|
編號
|
成分
|
規(guī)格
|
|
試劑一
|
2×Probe qPCR MagicMix
|
500μL(本色蓋)
|
|
試劑二
|
熒光PCR專用模板稀釋液
|
1mL(黃蓋)
|
|
試劑三
|
庚型肝炎病毒qPCR引物混合液
|
100μL(白蓋)
|
|
試劑四
|
庚型肝炎病毒qPCR探針
|
50μL(棕色管)
|
|
試劑五
|
庚型肝炎病毒探針法qPCR陽性對照(1×10E8/μL)
|
50μL(紅蓋)
|
|
使用手冊
|
1 份
|
運輸及保存：
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。
自備試劑：
樣品DNA。
使用方法：
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）：
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。
6. 放冰上待用。重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備：
7. 如果有 N 個樣品，最好設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 陽性對照的 10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為 NC。
8. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù) DNA 提取試劑盒兼容。
三、Probe qPCR反應（20μL體系，在樣品制備室進行）：
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于 PCR 陽性對照（用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10. 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加）：
|
成份
|
N+2 個樣品管
|
PCR 陰性對照管
|
標準曲線樣品管2-7管
|
|
2×Probe qPCR MagicMix
|
10μL
|
10μL
|
各10μL
|
|
庚型肝炎病毒qPCR探針
|
1μL
|
1μL
|
各1μL
|
|
庚型肝炎病毒探針法qPCR引物混合液
|
2μL
|
2μL
|
各2μL
|
|
N+2個待測DNA模板
|
7μL
|
--
|
--
|
|
超純水
|
--
|
7μL
|
--
|
|
第7步所得標準曲線樣品稀釋液(2-7號)
|
--
|
--
|
各7μL2號樣到2號管,3號樣到3號管
|
11. 蓋上蓋子后上機，按下面參數(shù)進行PCR：
|
過程
|
溫度
|
時間
|
|
預變性
|
95℃
|
3 min
|
|
PCR反應40個循環(huán)
|
95℃
|
15 sec
|
|
60℃
|
1 min（采集FAM通道的熒光信號）
|
四、數(shù)據(jù)處理：
12. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 RNA濃度的 log 值，再推算出其濃度。
13. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴增曲線，Ct 值應該小于或等于 30。對待測樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間，則重復一次。若重復結果 Ct值小于 40，擴增曲線有明顯起峰，該樣本判斷為陽性，否則為陰性。
五、特別提示：
本公司的所有產品，僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
購物車
幫助
021-54845833/15800441009
