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細(xì)胞培養(yǎng)操作
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細(xì)胞名稱 |
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貨 號(hào) |
TW-CC3749 |
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細(xì)胞品牌 |
通蔚生物 |
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種屬來(lái)源 |
小鼠 |
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組織來(lái)源 |
皮下結(jié)締組織 |
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生長(zhǎng)特性 |
貼壁生長(zhǎng) |
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細(xì)胞形態(tài) |
成纖維細(xì)胞 |
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細(xì)胞簡(jiǎn)介 |
Luciferase L929細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)螢光蛋白。該細(xì)胞株性狀穩(wěn)定，培養(yǎng)時(shí)不需要添加抗生素維持?？捎米魑灩獾鞍谆钚詸z測(cè)中的陽(yáng)性對(duì)照，也可用于活體動(dòng)物成像實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。1948年三月建立了NCTC clone 929(小鼠結(jié)締組織)，細(xì)胞系L的克隆。細(xì)胞系L是最早建立的連續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞系之一，而clone 929是最早的克隆株。從一只100日齡的雄性C3H/An小鼠的正常皮下疏松結(jié)締組織入脂肪組織中建立了親本細(xì)胞系L。 第95代的細(xì)胞系L使用毛細(xì)管法分離單細(xì)胞建立了clone929。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)鼠痘病毒陰性。 |
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活性檢測(cè)報(bào)告 |
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puro藥篩濃度 |
L929-LUC細(xì)胞puro藥篩濃度為1. 0ug/ml，培養(yǎng)過(guò)程中可不用再添加puro，如若擔(dān)心抗性隨著傳代時(shí)間降低，可定期用0.5ug/ml濃度puro維持。 |
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生物安全等級(jí) |
1 |
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細(xì)胞規(guī)格 |
1x10?cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管 |
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保藏機(jī)構(gòu) |
ATCC; CCL-1 ATCC; CRL-6364 BCRC; 60091 BCRJ; 0188 DSMZ; ACC-2 ECACC; 85011425 ECACC; 85103115 ECACC; 88102702 |
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培養(yǎng)基 |
90%MEM+10%FBS+PS |
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培養(yǎng)條件 |
氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ |
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凍存條件 |
無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存 |
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細(xì)胞貨期 |
現(xiàn)貨，1周左右 |
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發(fā)貨方式 |
復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運(yùn)輸費(fèi)用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用） |
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供應(yīng)范圍 |
僅限于科研實(shí)驗(yàn)使用，絕不可作為動(dòng)物或人類(lèi)疾病的治療產(chǎn)品使用 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作
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T25瓶 |
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收貨處理 |
觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) |
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傳代密度 |
細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) |
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傳代比例 |
首次傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿 |
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傳代方法 |
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 |
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注意事項(xiàng)
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1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。 |
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凍存管 |
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收貨處理 |
收到細(xì)胞后，需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇 |
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傳代密度 |
第二天換液并檢查細(xì)胞密度 |
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傳代比例 |
一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 |
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傳代方法 |
將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
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1.收貨時(shí)若發(fā)現(xiàn)干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察，若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存。 2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請(qǐng)立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞。 |
細(xì)胞凍存操作
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凍存液配方 |
無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存 |
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細(xì)胞密度 |
待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例 |
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凍存方法 |
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。 b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。 c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
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注意事項(xiàng) |
凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 |
售后服務(wù)
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細(xì)胞予 |
1.細(xì)胞運(yùn)輸中遭遇的各種問(wèn)題，細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)。 |
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2.收到細(xì)胞未開(kāi)封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。 |
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3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問(wèn)題，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。 |
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4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置2小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨細(xì)胞復(fù)蘇2天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。 |
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5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時(shí)并且未開(kāi)封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。 |
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6.細(xì)胞活性問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品3天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。 |
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細(xì)胞不予 |
1.客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)。 |
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2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。 |
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3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。 |
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4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。 |
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5.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題的，不重發(fā)。 |
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6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問(wèn)題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的，不重發(fā)。 |
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特別說(shuō)明 |
上海通蔚生物客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,有任何技術(shù)問(wèn)題可以撥打免費(fèi)服務(wù)電話 : 021-54845833 ,我們隨時(shí)給予實(shí)驗(yàn)中的免費(fèi)解答。 |
