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021-54845833/15800441009
基本信息
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細(xì)胞名稱 |
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細(xì)胞品牌 |
通蔚生物 |
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細(xì)胞規(guī)格 |
1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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細(xì)胞英文 |
HEK293FT細(xì)胞 |
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細(xì)胞簡介 |
如果要使用 ViraPower? 慢病毒表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)生高滴度的慢病毒，293FT 細(xì)胞系是理想的選擇。293FT 細(xì)胞系是生長快速，非常易于轉(zhuǎn)染的克隆分離物，來自通過 SV40 大 T 抗原轉(zhuǎn)化的人胚胎腎細(xì)胞。 ViraPower? 表達(dá)載體和 ViraPower? 慢病毒包裝混合物 (ViraPower? Lentiviral Packaging Mix) 共轉(zhuǎn)染進(jìn) 293FT 細(xì)胞中時，可形成高水平的病毒 RNA 及包裝所需的 gag/pol 和 rev 蛋白。 |
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種屬來源 |
人 |
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組織來源 |
胚腎 |
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疾病特征 |
正常 |
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支原體檢測 |
陰性 |
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細(xì)胞形態(tài) |
圓形 |
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生長特性 |
貼壁生長 |
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特征特性 |
該細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)SV40大T抗原，并且促進(jìn)最適病毒產(chǎn)物的產(chǎn)生 |
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生長條件 |
氣相：空氣，95%；二氧化碳，5% ; 溫度：37℃ |
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傳代方法 |
細(xì)胞密度> 5×105 cells/ml |
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優(yōu) 勢 |
增長迅速 高效轉(zhuǎn)染 高病毒滴度 極高的蛋白表達(dá)水平 |
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重要特性 |
來源于SV40大T抗原轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞，是具有高度可轉(zhuǎn)然性的克隆分離產(chǎn)物。存在SV40大T抗原蛋白能從含SV40起點的載體上進(jìn)行非常高水平的表達(dá)。實際上它比以往使用的293細(xì)胞或T抗原轉(zhuǎn)化的COS細(xì)胞表達(dá)水平更高。 |
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傳代情況 |
C3 |
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培 養(yǎng) 基 |
DMEM-H: Dulbecco＇s Modified Eagle＇s Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10% FBS；0.1 mM MEM Non-Essential + Amino Acids (NEAA) + 2 mM L-glutamine + 1% Pen-Strep (optional) + 500 ?g/ml Geneticin |
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凍存條件 |
基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS |
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發(fā)貨方式 |
快遞運輸(特殊情況的另處理) |
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供應(yīng)范圍 |
僅限于科研實驗使用，不得用于其它用途 |
接受后處理
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處理1 |
收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們 |
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處理2 |
請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h |
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處理3 |
棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基 |
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處理4 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請及時進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司的完全培養(yǎng)基 |
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處理5 |
接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系 |
細(xì)胞操作
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復(fù)蘇細(xì)胞 |
將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
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細(xì)胞傳代 |
如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng): |
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1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。 |
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2. 加 1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 |
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3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。 |
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4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
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細(xì)胞凍存 |
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類: |
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1. 棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 |
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2. 4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml 細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。 |
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3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
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注意事項 |
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 |
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2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。 |
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3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細(xì)胞均會貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺盼藍(lán)染色測定細(xì)胞活力，如果證實細(xì)胞活力正常， 請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活力，請拍下照片及時和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。 |
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4. 靜置細(xì)胞貼壁后，請將細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng)，待細(xì)胞匯合度80%左右時正常傳代。 |
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5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。 |
售后服務(wù)
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細(xì)胞予重發(fā) |
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1. 細(xì)胞運輸中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)。 |
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2. 收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。 |
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3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)。 |
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4.常溫發(fā)貨細(xì)胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨細(xì)胞復(fù)蘇2天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)。 |
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5. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染經(jīng)核實后，重發(fā)。 |
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6. 細(xì)胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實實驗結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)。 |
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細(xì)胞不予重發(fā) |
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1. 客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)。 |
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2. 客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。 |
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3. 非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。 |
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4. 細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。 |
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5. 細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。 |
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6. 收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。 |
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特別說明 |
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上海通蔚生物客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，有任何技術(shù)問題可以撥打免費服務(wù)電話021-54845833或15800441009，我們隨時給予實驗中的免費解答。 |
