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021-54845833/15800441009
小鼠音猬因子蛋白(SHH)ELISA試劑盒
簡介
音猬因子(SHH)是由SHH基因編碼的一種蛋白質，這種信號分子是調節(jié)所有不同類型動物的胚胎形態(tài)發(fā)生的關鍵，SHH基因是刺猬基因家族的成員，有五種DNA序列改變或剪接變體，它位于第七號染色體上，啟動音速刺猬蛋白的產生，這種蛋白向胚胎組織發(fā)送短程和遠程信號，以調節(jié)發(fā)育，SHH控制器官發(fā)育和中樞神經系統(tǒng)、四肢、手指和身體其他許多部位的組織，音猬因子是一種形態(tài)原，它利用法旗模型所描述的濃度梯度來塑造發(fā)育中的胚胎，這種模型有一個非均勻分布的SHH分子，它根據(jù)濃度來支配不同的細胞的命運。
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術 : 將捕獲抗體包被于酶標板上，捕獲樣品及標準品中的待測物SHH，清洗后，再加入生物素標記的檢測抗體進行孵育后清洗，形成“捕獲抗體-抗原-檢測抗體”免疫復合物，隨后加入鏈霉親和素偶聯(lián)的辣根過氧化物酶進行孵育，待孵育結束后清洗，接著加入TMB顯色后，若樣本中有待測物則顯藍色，加入終止液停止反應。檢測過程中游離的成分均被洗去，用酶標儀在450 nm處測OD值，顏色的深淺和樣品中的待測物的含量呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣本中SHH的濃度。
需要的其他材料
2. 移液器及槍頭；
3. 蒸餾水或去離子水；
4. 100-1000 mL刻度量筒；
5. 洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機；
6. 水平軌道微孔板振蕩器，能夠保持500±50 rpm的速度；
7. 用于稀釋標準品和樣品的試管。
樣品保存
樣品收集后若在 1 周內進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃（1個月內檢測），或-80℃（6個月內檢測），避免反復凍融，標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
試劑準備工作
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
洗滌液/稀釋液配置
如果洗滌液/稀釋液（20×）有晶體析出，需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋（例如：1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水）
標準品配置
試劑盒中取出標準品，準備7個試管，先從36ng/mL標準品（200μL）按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至1800pg/mL（例：50μL的標準品母液+950μL的1×稀釋液，制備得到1000μL的1800pg/mL濃度標準品），隨后在6個試管中分別加入500μL的1×稀釋液，在這6個單獨的試管中將1800pg/mL標準品依次2倍倍比稀釋至6個梯度，共配制7個濃度的標準品，依次為: 1800pg/mL、 900pg/mL、 450pg/mL、 225pg/mL、 112.5pg/mL、 56.25pg/mL、 28.13pg/mL，從最高濃度標準品溶液中吸取500μL標準品到下一個試管中，輕輕吹打混勻，以此類推進行標準品的倍比稀釋（如圖所示），1×稀釋液用作零濃度標準品(0pg/mL)。
抗體工作液配置
使用前10分鐘，將100×生物素化抗體于1000×g離心1分鐘，隨后用1×稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×生物素化抗體工作液，根據(jù)所需用量當日配置當日使用。
酶結合物工作液配置
使用前10分鐘，將100×SA-HRP溶液于1000×g離心1分鐘，隨后用1×稀釋液將100×SA-HRP稀釋成1×SA-HRP工作液，根據(jù)所需用量配置。
備 注：如待測樣本中SHH度高于標準品最高值，請根據(jù)實際情況選擇適當?shù)南♂尡稊?shù)。
結果的計算
計算標準品和樣本復孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標準曲線(作圖時去掉空白組的值)。或者使用能夠生成四參數(shù)邏輯（4-P）曲線擬合的計算機軟件來創(chuàng)建標準曲線。若樣品OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應的稀釋倍數(shù)。
示例數(shù)據(jù)
標準品濃度
1800
900
450
225
112.5
56.25
28.13
0
OD值
2.428
1.632
0.901
0.783
0.429
0.288
0.136
0.073
校正OD值
2.355
1.559
0.828
0.71
0.356
0.215
0.063
0
以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實驗者需根據(jù)自己的實驗數(shù)據(jù)建立標準曲線。
(pg/mL)
下圖所示標準曲線僅供示例，結果計算應以同次試驗標準品所繪標準曲線為準計算樣本結果
重復性
板內變異系數(shù)小于10%，板間變異系數(shù)小于10%。
靈敏度
經樣本測試，本試劑盒的檢測靈敏度為14.07pg/mL。
特異性
該試劑盒測定可識別重組小鼠SHH。
其他相關蛋白在稀釋緩沖液中制備為50ng/mL，并測定交叉反應性。沒有觀察到明顯的交叉反應。
使用ELISA試劑盒之前，請您必須完整閱讀說明書，本產品僅供科研使用，不得用于臨床診斷和治療。
