腸粘附性大腸桿菌屬(Enteroadhesive Escherichia coli)為新近從腸致病性大腸桿菌菌群中分出的致腹瀉性大腸桿菌,能黏附于小腸上皮細胞,并在其表面大量繁殖而引起微絨毛病變。已知有兩個菌種和十余個血清型。聚合性黏附大腸埃希菌黏附于腸粘膜時呈聚合狀,可釋放腸毒素;廣泛黏附大腸埃希菌不產(chǎn)生腸毒素及Vero毒素,腹瀉機制不明。是兒童腹瀉,尤其是發(fā)展中國家兒童腹瀉的重要病原,并且還與人類免疫缺陷病毒感染者的慢性腹瀉和旅游者腹瀉有關(guān),因此快速檢測腸粘附性大腸桿菌具有重要的意義。本產(chǎn)品就是以探針法qPCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測腸粘附性大腸桿菌的試劑盒,它具有下列特點:
規(guī)格及成分
成分
規(guī)格
包裝
2×Probe qPCR MasterMix
0.5mL
0.5mL本色蓋
熒光PCR專用模板稀釋液
1mL
1.5mL綠蓋管
超純水
1mL
1.5mL藍蓋管
腸粘附性大腸桿菌qPCR引物-探針干粉
50次
2.0mL棕色管
腸粘附性大腸桿菌qPCR陽性對照(1×10E7拷貝/μL)
50μL
0.5mL黃蓋管
使用手冊
1份
無
本產(chǎn)品采用五孔盒包裝
注 意:引物-探針干粉在使用前需要短暫離心,然后在離心管中加入162uL的超純水充分混勻后再使用,未用完的需要-20℃保存。
使用方法
稀釋標準曲線樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2,1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR專用模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。
3. 在6號管中加入5μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在5號管中加入5μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在4號管中加入5μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA
低溫運輸,-20℃保存,有效期1年
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