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馬冠狀病毒(Equine Coronavirus，ECoV)和SARS-CoV、SARS-CoV-2、MERS-CoV均是β冠狀病毒屬成員，其中馬冠狀病毒屬于Embecovirus亞屬，其基因組為單鏈正義RNA病毒，長(zhǎng)度大約為30 knt。馬冠狀病毒冠狀病毒粒子形狀并不規(guī)則，直徑約60-220nm。病毒具有包膜結(jié)構(gòu)。這種病毒易于通過(guò)呼吸道傳播。馬冠狀病毒的自然寄主主要是馬科動(dòng)物，尤其是馬。馬冠狀病毒感染可導(dǎo)致馬出現(xiàn)冠狀病毒感染癥狀，包括但不限于上呼吸道疾病、腸道疾病和神經(jīng)癥狀。在馬群中，馬冠狀病毒可導(dǎo)致馬出現(xiàn)發(fā)熱、食欲不振、呼吸困難、咳嗽、鼻腔分泌物增多等癥狀。在嚴(yán)重情況下，馬冠狀病毒感染還可能引發(fā)腹瀉和脫水，給馬養(yǎng)殖業(yè)造成重大威脅。因此快速檢測(cè)馬冠狀病毒具有重要的意義。為此，本公司以探針?lè)╭RT-PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)了馬冠狀病毒的檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
規(guī)格及成分
成分
規(guī)格
包裝
探針?lè)?/span>qRT-PCR緩沖液
500μL
0.5mL藍(lán)蓋管
探針?lè)?/span>qRT-PCR酶混合液v2
50μL
0.5mL紅蓋管
熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液
1mL
1.5mL綠蓋管
馬冠狀病毒qRT-PCR引物-探針干粉
50次
0.5mL棕色管
馬冠狀病毒qRT-PCR陽(yáng)性對(duì)照(1E7拷貝/μL)
50μL
0.5mL黃蓋管
使用手冊(cè)
1份
無(wú)
本產(chǎn)品采用五孔盒包裝
注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入165uL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。
使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。如果需要RNA陽(yáng)性樣品，需要另外訂購(gòu)。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6、5、4、3、2、1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。
3. 在6號(hào)管中加入5 μL 1E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1E6拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號(hào)管中加入5 μL 1E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
樣品RNA，超純水，核酸純化試劑盒
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
