豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒(Porcine Endogenous Retrovirus,PERV)為γ逆轉(zhuǎn)錄病毒,可在體外感染豬、犬、貓、蝙蝠及多種靈長(zhǎng)類動(dòng)物細(xì)胞和十余種人源細(xì)胞。豬是異種器官移植常見的供體來源之一,豬器官作為連接兩個(gè)物種間的橋梁,其攜帶的病毒有可能在物種間傳播并存在引起人畜共患病的風(fēng)險(xiǎn)。PERV 在人群中廣泛傳播,PERV或?qū)⑴c人內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒(Human Endogenous Retrovirus,HERV)結(jié)合形成一種新的病毒。因此,快速檢測(cè)豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒具有重要的意義。為此,本公司以探針法qRT-PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)了豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒的檢測(cè)試劑盒,它具有下列特點(diǎn):
規(guī)格及成分
成分
規(guī)格
包裝
探針法qRT-PCR緩沖液
500μL
0.5mL藍(lán)蓋管
探針法qRT-PCR酶混合液v2
50μL
0.5mL紅蓋管
熒光PCR專用模板稀釋液
1mL
1.5mL綠蓋管
豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒qRT-PCR引物-探針干粉
50次
0.5mL棕色管
豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒qRT-PCR陽性對(duì)照(1E7拷貝/μL)
50μL
0.5mL黃蓋管
使用手冊(cè)
1份
1份
本產(chǎn)品采用五孔盒包裝
注 意:引物-探針干粉在使用前需要短暫離心,然后在離心管中加入165μL的超純水充分混勻后再使用,未用完的需要-20℃保存。
使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對(duì)照。如果需要RNA陽性樣品,需要另外訂購。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為6、5、4、3、2、1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。
3. 在6號(hào)管中加入5 μL 1E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1E6拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在4號(hào)管中加入5 μL 1E5拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
樣品RNA
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期2年
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