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人皰疹病毒6型探針?lè)╭PCR試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
人皰疹病毒6型（Human Herpesvirus-6，HHV-6）屬皰疹病毒科β亞科，為1986年從淋巴增生性疾病和艾滋病患者淋巴細(xì)胞中培養(yǎng)獲得的一種新病毒。HHV-6病毒顆粒呈球形，有包膜，平均直徑約為150納米，基因組為線狀雙鏈DNA。其基因結(jié)構(gòu)和抗原性與其他已知的5種皰疹病毒不同。HHV-6為嗜淋巴細(xì)胞病毒，可在T型及B型淋巴細(xì)胞內(nèi)復(fù)制。根據(jù)抗原性不同，又可將HHV-6分為A、B兩組。HHV-6與人巨細(xì)胞病毒(HCMV /HHV-5)宿主相似，主要感染CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞，亦可在唾液腺、乳腺、腎臟中潛伏并持續(xù)進(jìn)行低密度復(fù)制。病毒在淋巴細(xì)胞內(nèi)復(fù)制時(shí)可產(chǎn)生明顯的細(xì)胞病變，并導(dǎo)致宿主細(xì)胞破裂、溶解。HHV-6可通過(guò)唾液飛沫及密切接觸、輸血或器官移植傳播。除免疫低下外，絕大多數(shù)人感染后終身都不會(huì)產(chǎn)生明顯癥狀；免疫低下者，潛伏的病毒可被激活并產(chǎn)生急性感染癥狀，此時(shí)會(huì)出現(xiàn)間質(zhì)性肺炎、腦炎、腦膜炎、肝炎及多器官衰竭等癥狀，活化的病毒可大規(guī)模感染T淋巴細(xì)胞，使免疫功能進(jìn)一步削弱，對(duì)人體健康產(chǎn)生較大影響，因此人皰疹病毒6型的快速準(zhǔn)確鑒定對(duì)該病的預(yù)防和治療有著重要作用，為此本公司開(kāi)發(fā)了簡(jiǎn)單快捷的HHV-6探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
產(chǎn)品及特點(diǎn)
人皰疹病毒6型（Human Herpesvirus-6，HHV-6）屬皰疹病毒科β亞科，為1986年從淋巴增生性疾病和艾滋病患者淋巴細(xì)胞中培養(yǎng)獲得的一種新病毒。HHV-6病毒顆粒呈球形，有包膜，平均直徑約為150納米，基因組為線狀雙鏈DNA。其基因結(jié)構(gòu)和抗原性與其他已知的5種皰疹病毒不同。HHV-6為嗜淋巴細(xì)胞病毒，可在T型及B型淋巴細(xì)胞內(nèi)復(fù)制。根據(jù)抗原性不同，又可將HHV-6分為A、B兩組。HHV-6與人巨細(xì)胞病毒(HCMV /HHV-5)宿主相似，主要感染CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞，亦可在唾液腺、乳腺、腎臟中潛伏并持續(xù)進(jìn)行低密度復(fù)制。病毒在淋巴細(xì)胞內(nèi)復(fù)制時(shí)可產(chǎn)生明顯的細(xì)胞病變，并導(dǎo)致宿主細(xì)胞破裂、溶解。HHV-6可通過(guò)唾液飛沫及密切接觸、輸血或器官移植傳播。除免疫低下外，絕大多數(shù)人感染后終身都不會(huì)產(chǎn)生明顯癥狀；免疫低下者，潛伏的病毒可被激活并產(chǎn)生急性感染癥狀，此時(shí)會(huì)出現(xiàn)間質(zhì)性肺炎、腦炎、腦膜炎、肝炎及多器官衰竭等癥狀，活化的病毒可大規(guī)模感染T淋巴細(xì)胞，使免疫功能進(jìn)一步削弱，對(duì)人體健康產(chǎn)生較大影響，因此人皰疹病毒6型的快速準(zhǔn)確鑒定對(duì)該病的預(yù)防和治療有著重要作用，為此本公司開(kāi)發(fā)了簡(jiǎn)單快捷的HHV-6探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化，分析靈敏度高，能達(dá)到100拷貝/反應(yīng)。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)人皰疹病毒6型DNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他病毒的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測(cè)，又可用于定量檢測(cè)。用于定量檢測(cè)時(shí)線性范圍至少為5各數(shù)量級(jí)。
6. 本產(chǎn)品足夠50次20 μL體系的探針?lè)晒舛縋CR反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色蓋 |
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熒光PCR模板專(zhuān)用稀釋 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL藍(lán)蓋管 |
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人皰疹病毒6型qPCR引物-探針干粉 |
50次 |
1.5mL棕色管 |
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人皰疹病毒6型PCR陽(yáng)性對(duì)照(1E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊(cè) |
1份 |
無(wú) |
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
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注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入165uL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6、5、4、3、2、1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同。
3. 在6號(hào)管中加入5 μL 1E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1E6拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號(hào)管中加入5 μL 1E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個(gè)樣品，設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0 μL上步所得4號(hào)稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次核酸純化所要求的起始樣品體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。也可以選購(gòu)本公司的相關(guān)產(chǎn)品和免核酸純化樣本釋放劑。
Probe qPCR反應(yīng)20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板），6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板），1個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照（直接用第6步第4號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
數(shù)據(jù)處理
1. 如果樣本制備陽(yáng)性對(duì)照或PCR陽(yáng)性對(duì)照(包括標(biāo)曲樣本)結(jié)果為陰性，則整個(gè)實(shí)驗(yàn)無(wú)效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要重新樣本制備，重新進(jìn)行PCR擴(kuò)增或跟廠家聯(lián)系。如果樣本制備陰性對(duì)照或PCR陰性對(duì)照結(jié)果為陽(yáng)性，說(shuō)明環(huán)境污染，則整個(gè)實(shí)驗(yàn)無(wú)效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要跟廠家聯(lián)系。
2. 如果陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照均正常，則實(shí)驗(yàn)有效，可以進(jìn)入后續(xù)分析。
3. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
4. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照必須無(wú)Ct或Ct大于或等于40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于40，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。如果實(shí)驗(yàn)有效，則分析待測(cè)樣品，如果無(wú)Ct或Ct大于或等于40，則為陰性。如果Ct小于40則為陽(yáng)性。
自備試劑
樣品DNA
樣品DNA
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期2年
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期2年
