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乙型肝炎病毒前基因組RNA簡(jiǎn)稱HBV pgRNA (Hepatitis B Virus pregenomic RNA，pgRNA)，它是肝細(xì)胞內(nèi)HBV cccDNA轉(zhuǎn)錄得到的RNA。研究顯示，對(duì)治療中的慢性乙型肝炎患者，當(dāng)病毒的逆轉(zhuǎn)錄和DNA合成被抑制后，其血清中的HBV RNA水平能反映肝細(xì)胞內(nèi)cccDNA的存在及其轉(zhuǎn)錄活性，而且還證實(shí)了慢性乙型肝炎患者血清中存在的HBV RNA為3.5kb大小的前基因組RNA，這些pgRNA是以HBV RNA病毒樣顆粒形式存在于成熟病毒顆粒的核衣殼內(nèi)，并和持續(xù)的病毒感染及病毒學(xué)反彈風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，因此快速靈敏診斷乙型肝炎病毒前基因組RNA具有重要意義。本產(chǎn)品以探針?lè)晒舛縍T-PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的專門檢測(cè)乙型肝炎病毒前基因組RNA的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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探針?lè)?/span>qRT-PCR緩沖液 |
500μL |
0.5mL藍(lán)蓋管 |
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探針?lè)?/span>qRT-PCR酶混合液v2 |
50μL |
0.5mL紅蓋管 |
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熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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乙型肝炎病毒前基因組RNA qRT-PCR引物-探針干粉 |
50次 |
1.5mL棕色管 |
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乙型肝炎病毒前基因組RNA RT-PCR陽(yáng)性對(duì)照 (1×10E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊(cè) |
1份 |
無(wú) |
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
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注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入162μL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2，1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45μL熒光RT-PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。
3. 在6號(hào)管中加入5μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5μL 1×10E6拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號(hào)管中加入5μL 1×10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
自備試劑
樣品RNA
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
