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人EGFR基因c.2573T＞G(L858R)點突變探針法qPCR檢測試劑盒
產(chǎn)品及特點
EGFR的全名叫表皮生長因子受體(Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR)， 是一種廣泛分布于人體各組織細(xì)胞膜上的具有酪氨酸激酶的糖蛋白，在許多實體腫瘤中EGFR高表達(dá)或異常表達(dá)，因此，以EGFR為治療靶標(biāo)的分子靶向治療成為國內(nèi)外腫瘤界關(guān)注的焦點。由于EGFR基因激活突變使得靶向治療效果明顯，因此用藥前對患者進(jìn)行EGFR基因激活突變檢測具有重要的指導(dǎo)意義。人EGFR基因激活突變最常見的為19號外顯子缺失突變和21號外顯子的2573T>G突變（rs121434568），它們占人EGFR所有激活突變的80-90%，因此研究2573T>G突變具有重要的研究意義，為此本公司開發(fā)了專門檢測2573T>G突變的探針法qPCR檢測試劑盒，它具有下列特點：
EGFR的全名叫表皮生長因子受體(Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR)， 是一種廣泛分布于人體各組織細(xì)胞膜上的具有酪氨酸激酶的糖蛋白，在許多實體腫瘤中EGFR高表達(dá)或異常表達(dá)，因此，以EGFR為治療靶標(biāo)的分子靶向治療成為國內(nèi)外腫瘤界關(guān)注的焦點。由于EGFR基因激活突變使得靶向治療效果明顯，因此用藥前對患者進(jìn)行EGFR基因激活突變檢測具有重要的指導(dǎo)意義。人EGFR基因激活突變最常見的為19號外顯子缺失突變和21號外顯子的2573T>G突變（rs121434568），它們占人EGFR所有激活突變的80-90%，因此研究2573T>G突變具有重要的研究意義，為此本公司開發(fā)了專門檢測2573T>G突變的探針法qPCR檢測試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到1000拷貝/μL。
3. 分辨率高，能檢測出5%的點突變。
4. 一管式檢測，野生型探針用FAM標(biāo)記，突變型探針用HEX標(biāo)記。
5. 同時提供野生型和突變型兩種陽性對照，便于排除假陰性樣品。
6. 特異性高，引物和探針是根據(jù)人EGFR基因2573T>G突變設(shè)計，不會跟其他突變發(fā)生交叉反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能定性，不能定量。
8. 本產(chǎn)品足夠50次20 μL體系的點突變探針法熒光定量PCR反應(yīng)。
9. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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2×點突變Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL藍(lán)蓋管 |
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人EGFR基因rs121434568位點檢測引物-探針混合液干粉 |
50次 |
0.5 mL白色管 |
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人EGFR基因rs121434568位點檢測引物-探針混合液干粉 |
250 μL |
1.5mL棕色管 |
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人EGFR基因rs121434568位點突變型陽性對照(1×10E4拷貝/μL) |
250 μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
無 |
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
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注 意：使用前需要在引物探針干粉管中加入160 μL的自備超純水，震蕩混勻后再取用一次沒用完剩下的需要放-20℃保存。 |
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使用方法
樣品DNA的制備
樣品DNA的制備
1. 如果有N個樣品，則進(jìn)行N次純化，得到的DNA最后溶解在TE中，并需要用NanoDrop進(jìn)行定量。最后的濃度不能低于0.2ug/μL。
2. 本試劑盒跟市場上大多數(shù)樣品DNA提取試劑盒兼容。
點突變Probe qPCR反應(yīng)20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行
3. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+3個PCR管，其中N個用于上步得到的N樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板，NC），3個用于陽性對照（PC）。
4. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子后加。
數(shù)據(jù)處理
1. 實驗有效性的判斷：首先分析擴增NC是否有FAM或/和HEX信號，如果有則表示實驗污染，本次實驗無效，無需分析所有實驗數(shù)據(jù)，需要尋找原因。如果無則表示實驗沒有污染，再分析三個PC。如果野生型PC沒有FAM擴增信號（有標(biāo)準(zhǔn)的倒S擴增曲線，下同），或突變型PC沒有HEX擴增信號，或雜合型PC沒有FAM和HEX擴增信號，則表示實驗無效，不需要分析樣本的數(shù)據(jù)，需要分析原因。如果三個PC正常（野生型PC有FAM擴增信號，突變型PC有HEX擴增信號，雜合型PC有FAM和HEX擴增信號），則實驗有效，可以分析樣本的數(shù)據(jù)。
2. 如果熒光定量PCR儀有基因分型的自動分析模塊，則進(jìn)入該模塊，獲得每個樣本的HEX值/FAM值的熒光比值，并根據(jù)熒光比值描出散點圖。熒光比值位于散點圖的X軸方向的樣本可以判為突變型，熒光比值將位于Y軸方向的樣本可以判為野生型，熒光比值位于X軸和Y軸中間的可以判為雜合子。擴增NC的熒光比值將位于原點附近。
3. 如果熒光定量PCR儀沒有基因分型的自動分析模塊，則需要手動分析。首先根據(jù)Ct值判斷每個樣本在FAM和HEX兩個通道的擴增情況。如果FAM通道的Ct低于35，則算FAM信號有擴增。
自備試劑
樣品DNA
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期1年
