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腸出血性大腸桿菌O104H4血清型探針法qLAMP試劑盒
產(chǎn)品及特點
大腸桿菌O104:H4型（Escherichia coli O104:H4）是腸出血性（Enterohemorrhagic）大腸桿菌的一個菌株，但它有部分腸聚集性大腸桿菌（Enteroaggregative）基因。該菌株導(dǎo)致了2011年O104:H4型大腸桿菌疫情，它分泌的毒素可損傷腸道黏膜，甚至進(jìn)入血液中破壞紅血球，導(dǎo)致溶血性病變，這種癥狀在腎臟中明顯，常導(dǎo)致急性腎衰竭，即為溶血性尿毒綜合癥，因此對大腸桿菌O104:H4型的快速準(zhǔn)確鑒定具有重要意義。為此本公司根據(jù)獨有的探針法LMAP技術(shù)，開發(fā)了簡單快捷的大腸桿菌O104:H4型LAMP檢測試劑盒，它具有下列特點：
產(chǎn)品及特點
大腸桿菌O104:H4型（Escherichia coli O104:H4）是腸出血性（Enterohemorrhagic）大腸桿菌的一個菌株，但它有部分腸聚集性大腸桿菌（Enteroaggregative）基因。該菌株導(dǎo)致了2011年O104:H4型大腸桿菌疫情，它分泌的毒素可損傷腸道黏膜，甚至進(jìn)入血液中破壞紅血球，導(dǎo)致溶血性病變，這種癥狀在腎臟中明顯，常導(dǎo)致急性腎衰竭，即為溶血性尿毒綜合癥，因此對大腸桿菌O104:H4型的快速準(zhǔn)確鑒定具有重要意義。為此本公司根據(jù)獨有的探針法LMAP技術(shù)，開發(fā)了簡單快捷的大腸桿菌O104:H4型LAMP檢測試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供DNA樣品。
2. 恒溫擴(kuò)增，簡單快捷。
3. 含熒光探針，擴(kuò)增的專一性比染料法和電泳法更強。
4. 檢測靈敏性一般比PCR高10倍以上。
5. 一般30分鐘內(nèi)出結(jié)果，比PCR快。
6. 引物根據(jù)大腸桿菌O104:H4型基因組的保守區(qū)設(shè)計，不會跟其他生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
7. 上樣量大，對20 μL的反應(yīng)體系，樣品加樣量高達(dá)到14 μL。
8. 內(nèi)含的dUTP-UNG可防交叉污染。
9. 提供無傳染性的陽性對照，便于分析實驗結(jié)果。
10. 本產(chǎn)品只能用于定性分析，不推薦用于定量分析。
11. 本產(chǎn)品足夠50次20 μL體系的探針法LAMP擴(kuò)增。
12. 只可用于科研。
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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4×LAMP MasterMix （探針法，待加酶） |
200μL |
0.5mL綠蓋管 |
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Bst DNA聚合酶2.0 |
50μL |
0.5mL紅蓋管 |
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20×大腸桿菌O104:H4型LAMP引物-探針混合液干粉 |
50次 |
0.5mL白蓋管 |
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大腸桿菌O104:H4型LAMP陽性對照（1×10E4拷貝/μL） |
250μL |
0.5mL黃蓋管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL藍(lán)蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
無 |
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注 意：使用前請在20×大腸桿菌O104:H4型LAMP引物-探針混合液干粉中加入55μL超純水， 渦旋震蕩半分鐘溶解。沒用完的需要放-20℃保存。 |
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本產(chǎn)品采用5孔盒包裝 |
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使用方法
樣品DNA的制備
樣品DNA的制備
1. 用自選方法純化樣品DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)DNA提取試劑盒兼容，包括本公司的免提取的核酸釋放劑。
2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個樣品制備，包括一個樣品制備陽性對照（PC）和一個樣品制備陰性對照（NC）。PC用10μL本試劑盒提供的陽性對照（1×10E4拷貝/μL）加一定量的水作為樣品制備PC，加水后的總體積跟所用核酸純化試劑盒所要求的起始樣本體積一致。NC用水替代。。
LAMP反應(yīng)20μL體系
3. 反應(yīng)設(shè)置：第一次使用時請把所有Bst DNA聚合酶2.0（50μL，本試劑盒提供）加入到 4×LAMP MasterMix（探針法，待加酶）中，輕柔顛倒 20 次充分混勻，然后再取用。如果有N+2個DNA純化樣品，則設(shè)置N+4個LAMP擴(kuò)增，增加LAMP擴(kuò)增陽性對照和LAMP擴(kuò)增陰性對照各1個。
4. 置于熒光定量PCR儀中65℃保溫60分鐘進(jìn)行擴(kuò)增，每分鐘在FAM通道采集一次熒光信號。
結(jié)果分析
結(jié)果分析
5. 樣品制備陽性對照和LAMP陽性對照的反應(yīng)液將有標(biāo)準(zhǔn)的S擴(kuò)增曲線，樣品制備陰性對照和LAMP陰性對照的反應(yīng)液將沒呈平線，沒有S曲線，否則提取實驗或擴(kuò)增實驗無效。如果陽性和陰性對照結(jié)果正常，則實驗有效，可以分析樣品的情況。樣品管的熒光曲線為S型，則說明樣品為陽性，如果為平線則說明待測樣品為陰性。典型的熒光檢測結(jié)果見下圖。左邊為陽性，右邊為陰性。
自備試劑
待測樣品
待測樣品
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運輸，-20℃保存，有效期1年
