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鸚鵡熱嗜衣原體探針法LAMP試劑盒
產(chǎn)品及特點
鸚鵡熱嗜衣原體(Chlamydophila psittaci)是衣原體科嗜衣原體屬成員之一，是一種多宿主、人畜共患的病原微生物，能感染包括人在內(nèi)的靈長類動物、家養(yǎng)和野生哺乳動物、禽類及兩棲動物。鸚鵡熱嗜衣原體感染家禽、寵物鳥和野鳥后，引起肺炎、呼吸困難等癥狀，嚴(yán)重的可導(dǎo)致死亡，有的還能呈隱性感染狀態(tài)。家畜（包括豬、牛、兔和羊等）感染后主要表現(xiàn)流產(chǎn)、肺炎、腸炎、多關(guān)節(jié)炎、尿道炎等多癥候群疾病。近年發(fā)現(xiàn)鸚鵡熱嗜衣原體還可感染馬屬動物，引起流產(chǎn)、呼吸道等疾病。人亦可感染而引起為肺炎、敗血癥和流產(chǎn)等，病畜禽和帶毒動物是本病的主要傳染源，因此快速檢測鸚鵡熱嗜衣原體具有重要的意義。本公司根據(jù)獨自開發(fā)的探針法LMAP技術(shù)，開發(fā)了簡單快捷的鸚鵡熱嗜衣原體探針法LAMP檢測試劑盒，它具有下列特點：
鸚鵡熱嗜衣原體(Chlamydophila psittaci)是衣原體科嗜衣原體屬成員之一，是一種多宿主、人畜共患的病原微生物，能感染包括人在內(nèi)的靈長類動物、家養(yǎng)和野生哺乳動物、禽類及兩棲動物。鸚鵡熱嗜衣原體感染家禽、寵物鳥和野鳥后，引起肺炎、呼吸困難等癥狀，嚴(yán)重的可導(dǎo)致死亡，有的還能呈隱性感染狀態(tài)。家畜（包括豬、牛、兔和羊等）感染后主要表現(xiàn)流產(chǎn)、肺炎、腸炎、多關(guān)節(jié)炎、尿道炎等多癥候群疾病。近年發(fā)現(xiàn)鸚鵡熱嗜衣原體還可感染馬屬動物，引起流產(chǎn)、呼吸道等疾病。人亦可感染而引起為肺炎、敗血癥和流產(chǎn)等，病畜禽和帶毒動物是本病的主要傳染源，因此快速檢測鸚鵡熱嗜衣原體具有重要的意義。本公司根據(jù)獨自開發(fā)的探針法LMAP技術(shù)，開發(fā)了簡單快捷的鸚鵡熱嗜衣原體探針法LAMP檢測試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供DNA樣品。
2. 恒溫擴(kuò)增，反應(yīng)設(shè)置更加簡單。
3. 含熒光探針，可以對擴(kuò)增進(jìn)行實時熒光檢測（需要熒光PCR儀）。
4. 檢測靈敏性一般比PCR高10倍以上。
5. 特異性高，根據(jù)鸚鵡熱嗜衣原體保守序列設(shè)計的4條特異引物和1條探針，不會跟其他生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
6. 一般630分鐘內(nèi)出結(jié)果，比PCR快。
7. 上樣量大，對20 μL的反應(yīng)體系，樣品加樣量高達(dá)到14 μL。
8. 內(nèi)含的dUTP-UNG可防交叉污染。
9. 提供無傳染性的陽性對照，便于分析實驗結(jié)果。
10. 提供內(nèi)參，便于排除假陰性結(jié)果。
11. 本產(chǎn)品只能用于定性分析，不推薦用于定量分析。
12. 本產(chǎn)品足夠50次20 μL體系的探針法LAMP擴(kuò)增。
13. 只可用于科研。
規(guī)格及成分
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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4×LAMP MasterMix（探針法，待加酶） |
200μL |
0.5mL綠蓋管 |
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Bst DNA聚合酶2.0 |
50μL |
0.5mL紅蓋管 |
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20×鸚鵡熱嗜衣原體探針法LAMP引物-探針混合液 |
50次 |
0.5mL棕色管 |
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鸚鵡熱嗜衣原體LAMP陽性對照（1×10E4拷貝/μL） |
250μL |
0.5mL黃蓋管 |
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鵡熱嗜衣原體LAMP內(nèi)參對照（1×10E4拷貝/μL） |
250μL |
0.5mL紫蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
無 |
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本產(chǎn)品采購五孔盒包裝 |
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注 意：引物干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入55 uL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
樣品DNA的制備
樣品DNA的制備
1. 用自選方法純化樣品DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)DNA提取試劑盒兼容，包括本公司的免提取的核酸釋放劑。
2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個樣品制備，包括一個樣品制備陽性對照（PC）和一個樣品制備陰性對照（NC）。PC用10μL本試劑盒提供的樣品陽性對照（1×10E4拷貝/μL）和10μL內(nèi)參陽性對照（1×10E4拷貝/μL）加一定量的水作為核酸提取陽性對照樣品，加水后的總體積必須跟核酸純化試劑盒所要求的起始樣本體積一致。NC用10μL本試劑盒提供的10μL內(nèi)參陽性對照（1×10E4拷貝/μL）加一定量的水充當(dāng)，加水后的總體積必須跟核酸純化試劑盒所要求的起始樣本體積一致。
探針法LAMP反應(yīng)20μL體系
3. 反應(yīng)設(shè)置：如果有N+2個DNA純化樣品，則設(shè)置N+4個LAMP擴(kuò)增，增加的兩個反應(yīng)分別是LAMP擴(kuò)增陽性對照和LAMP擴(kuò)增陰性對照。首次使用本試劑盒時，需要將Bst DNA聚合酶2.0全部加入到4×LAMP MasterMix（探針法）中，輕柔顛倒混勻1分鐘后再使用。未用完的部分需要放-20℃保存。
4. 如果使用熒光定量PCR儀，則設(shè)置60次循環(huán)，每次65℃保溫1分鐘，采集FAM通道和HEX通道的熒光信號。
結(jié)果分析
1. 實驗有效性的判斷：樣品制備陽性對照和LAMP陽性對照的FAM信號（對應(yīng)樣本）和HEX信號（對應(yīng)內(nèi)參）必須有標(biāo)準(zhǔn)的S擴(kuò)增曲線，樣品制備陰性對照的HEX信號（對應(yīng)內(nèi)參）必須有標(biāo)準(zhǔn)的S擴(kuò)增曲線，LAMP陰性對照的FAM信號和HEX信號必須呈現(xiàn)一條平線，沒有S曲線，否則提取實驗或擴(kuò)增實驗無效。如果上述陽性對照和陰性對照結(jié)果正常，則實驗有效，可以分析樣品的情況。
2. 待測樣品的結(jié)果判斷：在實驗有效的情況下，才有必要分析代測樣品管的熒光信號。如果其FAM熒光信號曲線為S型（無論HEX信號如何），則說明樣品為陽性。如果FAM熒光信號為平線則說明待測樣品為陰性。如果HEX熒光信號為S曲線，說明代測樣品（FAM曲線）為真陰性。如果HEX熒光信號也是平線，說明此樣品可能是假陰性，此樣品需要重復(fù)測試
自備試劑
待測樣品
待測樣品
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運輸，-20℃保存，有效期1年
