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豬輪狀病毒探針法RT-LAMP試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
豬輪狀病毒 (Porcine Rotavirus, PRV)是豬群中常見的引起腹瀉性疾病的主要病原。 幼齡仔豬易感，1～4 周齡仔豬發(fā) 病率超過 80%，死亡率達(dá) 7% ～20%，癥狀也較嚴(yán)重。同時(shí)，由于該病常與其他疾病混合感染，使病情加重，導(dǎo)致死亡率增高，給養(yǎng)殖戶帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。因此PRV的快速準(zhǔn)確鑒定對該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用，為此，本公司開發(fā)了本檢測試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
產(chǎn)品及特點(diǎn)
豬輪狀病毒 (Porcine Rotavirus, PRV)是豬群中常見的引起腹瀉性疾病的主要病原。 幼齡仔豬易感，1～4 周齡仔豬發(fā) 病率超過 80%，死亡率達(dá) 7% ～20%，癥狀也較嚴(yán)重。同時(shí)，由于該病常與其他疾病混合感染，使病情加重，導(dǎo)致死亡率增高，給養(yǎng)殖戶帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。因此PRV的快速準(zhǔn)確鑒定對該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用，為此，本公司開發(fā)了本檢測試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒RNA樣品。
2. 恒溫?cái)U(kuò)增，可以不需要貴重的熒光PCR等貴重儀器。
3. 含探針，可以進(jìn)一步提高專一性。
4. 檢測靈敏性可以達(dá)到100拷貝/反應(yīng)左右。
5. 特異性高，擴(kuò)增引物和檢測探針均根據(jù)豬輪狀病毒RNA保守序列設(shè)計(jì)，不會跟其他生物的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
6. 一般30分鐘內(nèi)出結(jié)果，比RT-PCR快。
7. 提供無傳染性的陽性對照，便于分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
8. 提供內(nèi)參，便于識別假陰性。
9. 本產(chǎn)品只能用于定性分析，不推薦用于定量分析。
10. 上樣量大，對20 μL的反應(yīng)體系，樣品加樣量高達(dá)到13μL。
11. 內(nèi)含的dUTP-UNG可防交叉污染。
12. 本產(chǎn)品足夠50次20 μL體系的探針法熒光RT-LAMP擴(kuò)增。
13. 只可用于科研。
規(guī)格及成分
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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RT-LAMP MasterMix（探針法，待加酶） |
200μL |
0.5mL本色蓋 |
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逆轉(zhuǎn)錄酶-擴(kuò)增酶混合液 |
100μL |
0.5mL紅蓋管 |
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20×豬輪狀病毒RT-LAMP引物探針混合液干粉 |
50次 |
0.5mL白色管 |
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豬輪狀病毒RT-LAMP陽性對照 |
2.5×10E6拷貝 |
0.5mL黃蓋管 |
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豬輪狀病毒RT-LAMP內(nèi)參 |
5×10E6拷貝 |
0.5mL綠蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
無 |
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本產(chǎn)品采購五孔盒包裝 |
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注 意：首次使用本產(chǎn)品的時(shí)候，需要在引物探針混合液干粉管中加入60uL的自備超純水，在陽性對照管和內(nèi)參管中分別加入250uL和500uL超純水，使得陽性對照和內(nèi)參的濃度均為1×10E4拷貝/μL。這些溶液用后還有剩余的需要放-20℃保存，陽性對照和內(nèi)參由于是高濃度的模板，容易污染沒有模板的Mix、引物探針混合液和水，因此需要在專門的場地進(jìn)行稀釋。 |
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使用方法
樣品RNA的制備
樣品RNA的制備
1. 用自選方法純化樣品RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)RNA提取試劑盒兼容，包括本公司的免提取的核酸釋放劑。
2. 如果有N個(gè)樣品，則需要做N+2個(gè)樣品制備，包括一個(gè)樣品制備陽性對照（PC）和一個(gè)樣品制備陰性對照（NC）。PC用10μL本試劑盒提供的陽性對照（1×10E4拷貝/μL）加一定量的水充當(dāng)，總體積必須跟核酸純化試劑盒所要求的起始樣品體積一樣，NC用水替代。
3. N+2個(gè)樣品的每個(gè)樣品在純化前，每個(gè)都要加入本試劑盒提供的10μL豬輪狀病毒RT-LAMP內(nèi)參（1×10E4拷貝/μL），相當(dāng)于每個(gè)樣品在進(jìn)行核酸純化前，含有1×10E5個(gè)拷貝的內(nèi)參分子。
探針法熒光RT-LAMP反應(yīng)20μL體系
4. 注意：第一次使用一個(gè)新的試劑盒時(shí)，必須先將100uL逆轉(zhuǎn)錄酶-擴(kuò)增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix（探針法，待加酶）中，蓋上蓋子后輕柔顛倒1分鐘混勻，然后再取用。
5. 反應(yīng)設(shè)置：如果有N+2個(gè)RNA純化樣品，則設(shè)置N+5個(gè)RT-LAMP擴(kuò)增，增加一個(gè)陰性對照、一個(gè)內(nèi)參擴(kuò)增對照和一個(gè)陽性對照。
結(jié)果分析
1. 判斷實(shí)驗(yàn)有效性：擴(kuò)增陰性對照必須沒有FAM信號的擴(kuò)增（擴(kuò)增是指Ct在40以內(nèi)，熒光信號呈現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)的S型擴(kuò)增曲線。任何一個(gè)不滿足此兩個(gè)條件，均判讀為無擴(kuò)增。下同），擴(kuò)增陽性對照必須有FAM信號的擴(kuò)增，否則整個(gè)實(shí)驗(yàn)無效，需要分析原因。擴(kuò)增陰性對照如果有擴(kuò)增，表示實(shí)驗(yàn)試劑或環(huán)境有模板DNA的污染。擴(kuò)增陽性對照沒有FAM信號的擴(kuò)增表示試劑盒或擴(kuò)增設(shè)備或操作有問題，需要分別排查。找到原因并解決問題后方可重啟實(shí)驗(yàn)。
2. 如果實(shí)驗(yàn)有效，則可以分析N+2個(gè)樣品的情況。
情況1、FAM信號有擴(kuò)增，則此樣品應(yīng)判為陽性，不論HEX信號有無擴(kuò)增。
情況2、樣FAM信號無擴(kuò)增，但HEX信號有擴(kuò)增，則此樣品應(yīng)判為陰性；
情況3、FAM信號和HEX信號均無擴(kuò)增，此樣品應(yīng)判為假陰性（可能原因之一是此樣品中有抑制物，也可能核酸在純化過程中丟失）。此樣品需要稀釋不同倍數(shù)后再測或/和重新進(jìn)行核酸制備。
自備試劑
待測樣品
待測樣品
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
