什么是elisa試劑盒？elisa是最經(jīng)典的一種免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)，中文名字叫酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定實(shí)驗(yàn)。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（elisa）是一種用來(lái)定量檢測(cè)樣本中的某種抗原方法。因此，因此在許多研究和檢測(cè)領(lǐng)域中使用 ELISA 來(lái)檢測(cè)和定量各種樣本類(lèi)型中的抗原，如使用 ELISA 分析細(xì)胞裂解物、血樣、食品等特定物質(zhì)。常見(jiàn)檢測(cè)領(lǐng)域包括如生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、農(nóng)學(xué)等。

Elisa試劑盒原理

酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（elisa）是一種高敏度的定量實(shí)驗(yàn)，通常用于測(cè)量生物樣品中分析物的濃度，如細(xì)胞因子和抗體。這種方法的一般原理包括三個(gè)步驟：

首先是將目標(biāo)分析物捕獲或固定在微孔板上，然后用目標(biāo)特異性檢測(cè)蛋白檢測(cè)分析物，最后就是酶反應(yīng)，既共軛酶將底物轉(zhuǎn)化為有色產(chǎn)物。根據(jù)不同的捕獲方法和檢測(cè)方法，elisa可以分為四種方法。

elisa方法

ELISA有四種主要的方法：直接法、間接法、夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法。每種類(lèi)型的描述如下，并用圖說(shuō)明了分析物和抗體是如何結(jié)合和使用的。

1.直接法（酶標(biāo)抗體結(jié)合抗原）

待測(cè)抗原粘附在微孔板的孔內(nèi)，然后使用帶酶標(biāo)的一抗與抗原結(jié)合，最后加入底物進(jìn)行顯色，并檢測(cè)吸光度。由于吸光度的大小與抗原體復(fù)合物的數(shù)量成一定的線(xiàn)性關(guān)系。因此，也就間接的實(shí)現(xiàn)了測(cè)定抗原數(shù)量的目標(biāo)。

2.間接法（一抗結(jié)合抗原，酶標(biāo)二抗結(jié)合一抗）

和直接法的區(qū)別在于兩種抗體代替一種抗體，結(jié)合抗原的抗體（一抗）不帶酶標(biāo)記物，當(dāng)抗原和抗體結(jié)合后，再使用帶酶標(biāo)的二抗結(jié)合一抗，加入底物顯色并檢測(cè)。

3.夾心法（捕獲抗體和一抗結(jié)合抗原，酶標(biāo)二抗結(jié)合一抗）

在間接法基礎(chǔ)上又再發(fā)展出更為復(fù)雜的夾心法，它在微孔底部預(yù)先包被一種捕獲抗體，用于結(jié)合抗原，在這個(gè)復(fù)合物的基礎(chǔ)上再結(jié)合一抗、二抗并檢測(cè)。

	直接法	間接法、夾心法
優(yōu)點(diǎn)	操作簡(jiǎn)單 不存在抗原和二抗發(fā)生交叉反應(yīng)導(dǎo)致的結(jié)構(gòu)錯(cuò)誤	二抗選擇面廣泛，制備也比較簡(jiǎn)單，大大降低成本；酶標(biāo)種類(lèi)也有更多選擇 一抗無(wú)需考慮標(biāo)記酶標(biāo)信息，所以它在制備過(guò)程可以盡可能的保證免疫結(jié)合活性，檢測(cè)靈敏度大大提高，因?yàn)樾盘?hào)得到放大。
缺點(diǎn)	檢測(cè)抗體制備比較困難且成本比較高，因?yàn)榧纫ＷC免疫活性還要標(biāo)記酶信息，檢測(cè)信號(hào)無(wú)法放大，信號(hào)越弱	潛在的二抗與目標(biāo)抗原發(fā)生反應(yīng)，造成信號(hào)錯(cuò)亂風(fēng)險(xiǎn)，更多操作步驟，反應(yīng)時(shí)間更長(zhǎng)。

  4.競(jìng)爭(zhēng)法（酶標(biāo)抗原和抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體）
  
  無(wú)法同時(shí)結(jié)合捕獲抗體和一抗的話(huà)，就不適合用夾心檢測(cè)。此時(shí)可以在微孔板孔內(nèi)包被抗體，同時(shí)提供帶標(biāo)記的同種抗原，把待檢測(cè)抗原和標(biāo)記抗原一起加入和抗體結(jié)合，由于兩者會(huì)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體，所以最終檢測(cè)的信號(hào)越高，證明代測(cè)抗原越少，反之則越多。

  

  Elisa試劑盒檢測(cè)步驟

  
  ELISA 是最簡(jiǎn)單的血液檢測(cè)之一。它快速、快捷，并且需要患者的血液樣本。ELISA的整個(gè)過(guò)程如下所述。
  
  抗體附著在作為固體表面的聚苯乙烯板上，并被細(xì)菌、其他抗體和激素吸引或具有親和力。
  
  將抗原-抗體混合物填充到包被有抗原的微量滴定板上，然后通過(guò)洗滌除去游離抗體。
  
  添加對(duì)一抗具有特異性的二抗，該二抗通常與酶結(jié)合。
  
  通過(guò)清洗板去除游離的酶聯(lián)二抗。
  
  最后，添加底物。底物被酶轉(zhuǎn)化形成有色產(chǎn)物，可以通過(guò)分光光度法進(jìn)行測(cè)量。
  
  通過(guò)ELISA檢測(cè)表明懷孕的HCG蛋白。將血液或尿液樣本和與酶連接的純化 HCG 組合添加到系統(tǒng)中。如果測(cè)試樣品中不存在 HCG，則只有連接的酶與固體表面結(jié)合。
  

  感興趣的物質(zhì)越多，發(fā)生的反應(yīng)就越多，與固體表面結(jié)合的連接酶就越少。這些反應(yīng)通常通過(guò)溶液顏色的變化來(lái)指示。

  

  Elisa試劑盒的優(yōu)點(diǎn)

  
  以下是 ELISA 技術(shù)的一些優(yōu)點(diǎn)：
  
  由于使用了兩種抗體，從 ELISA 獲取的結(jié)果可以準(zhǔn)確診斷特定疾病。
  
  可以對(duì)復(fù)雜的樣品進(jìn)行檢測(cè)，因?yàn)椴恍枰兓乖纯蓹z測(cè)。
  
  由于可以進(jìn)行直接和間接分析方法，因此反應(yīng)靈敏。
  
  這是一個(gè)快速測(cè)試，很快就能得出結(jié)果。
  
  ELISA 的可能檢測(cè)范圍包括定量、半定量、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)、定性、校準(zhǔn)曲線(xiàn)模型等。
  
  與需要放射性物質(zhì)存在的其他測(cè)定相比，更容易執(zhí)行且過(guò)程簡(jiǎn)單。
  

  elisa試劑盒是用來(lái)檢測(cè)什么的

  
  Elisa檢測(cè)如下：
  
  可以確定樣品中抗體和抗原的存在。
  
  它在食品工業(yè)中用于檢測(cè)存在的任何食品過(guò)敏原。
  
  測(cè)定病毒測(cè)試中血清抗體的濃度。
  
  在 疾病爆發(fā)期間，為了評(píng)估疾病的傳播，例如在最近的 COVID-19 爆發(fā)期間，正在使用快速檢測(cè)試劑盒來(lái)確定血液樣本中是否存在抗體。
  

  ELISA常見(jiàn)問(wèn)題解答

  
  1. 試劑盒從冰箱拿出后未充分平衡室溫，會(huì)有什么影響？
  
  如果試劑盒從冰箱中拿出后未充分平衡至室溫（20～25℃），可能會(huì)導(dǎo)致溫育時(shí)間不夠，從而使OD值偏低。
  
  2. 移液器吸液量不足或吸頭內(nèi)壁不清潔，會(huì)造成什么后果？
  
  移液器吸液量不足或吸頭內(nèi)壁不清潔，都可能導(dǎo)致加樣量不足，造成OD值偏低。此外，吸頭內(nèi)壁不清潔還可能導(dǎo)致非特異性吸附，進(jìn)一步影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
  
  3. 操作順序顛倒或遺漏步驟，會(huì)有什么后果？
  
  如果操作順序顛倒或遺漏步驟，很可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗，例如漏加酶結(jié)合物、顯色劑等，使整塊ELISA板都不顯色。
  
  4. 溫育時(shí)間不夠或溫育溫度未達(dá)到要求，會(huì)有什么影響？
  
  溫育時(shí)間不夠或溫育溫度未達(dá)到要求，都會(huì)影響反應(yīng)的進(jìn)行，導(dǎo)致OD值偏低。例如，保溫用的濕盒沒(méi)有預(yù)溫，或培養(yǎng)箱溫度不符合操作要求等。
  
  5. 洗板液在配置過(guò)程中出現(xiàn)問(wèn)題，會(huì)造成什么后果？
  
  洗板液在配置過(guò)程中出現(xiàn)問(wèn)題，如量筒不干凈、含有酶抑制物、濃度過(guò)高等，都可能導(dǎo)致洗去特異性結(jié)合物，使OD值偏低。
  
  6. 洗板時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、洗板次數(shù)過(guò)多，會(huì)有什么影響？
  
  這些操作都可能導(dǎo)致洗去結(jié)合在包被板的特異性結(jié)合物，從而使OD值偏低。
  
  7. 加完終止液后沒(méi)有輕輕充分混勻ELISA板液就立即讀數(shù)或放置太久才進(jìn)行讀數(shù)，會(huì)有什么影響？
  
  這可能導(dǎo)致檢測(cè)OD值偏低或偏高。一般建議在加完終止液后3分鐘之內(nèi)進(jìn)行讀數(shù)。
  
  8. 酶標(biāo)儀檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定有誤，會(huì)有什么后果？
  
  如果酶標(biāo)儀檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定有誤，例如選用的波長(zhǎng)不是產(chǎn)物的敏感吸收峰，可能會(huì)導(dǎo)致OD值偏低或偏高。
  
  9. 陰性對(duì)照出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，可能的原因是什么？
  
  陰性對(duì)照出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果可能是由于樣品、試劑被污染，或加樣時(shí)操作不當(dāng)導(dǎo)致相鄰孔之間溶液濺灑出現(xiàn)交叉污染。此外，抗體量過(guò)多導(dǎo)致非特異性結(jié)合也可能是一個(gè)原因。
  
  10. 酶標(biāo)板整體背景高，可能的原因是什么？
  
  酶標(biāo)板整體背景高可能是由于底物孵育過(guò)程沒(méi)有避光，導(dǎo)致背景信號(hào)增強(qiáng)。
  
  11. 復(fù)孔之間重復(fù)性差，可能的原因是什么？
  
  復(fù)孔之間重復(fù)性差可能是由于加樣本及試劑量不準(zhǔn)、孔間不一致等原因造成的。此外，操作條件、人員等的不一致也可能導(dǎo)致重復(fù)性差。
  
  12. 陽(yáng)性對(duì)照值偏低或低吸光度，可能的原因是什么？
  
  陽(yáng)性對(duì)照值偏低或低吸光度可能是由于溫育的時(shí)間或溫度不夠、顯色反應(yīng)時(shí)間太短、顯色液變質(zhì)或試劑過(guò)期、試劑稀釋有誤等原因造成的。