ELISA，即酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)，其基本原理是將一定濃度的抗原或者抗體通過(guò)物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入待檢標(biāo)本，通過(guò)酶標(biāo)物顯色的深淺間接反映被檢抗原或者抗體的存在與否或者量的多少。ELISA技術(shù)作為免疫標(biāo)記技術(shù)（包含免疫熒光技術(shù)，免疫放射技術(shù)，免疫酶技術(shù)和免疫膠體金技術(shù)）中的一種，已廣泛應(yīng)用于科研和臨床實(shí)驗(yàn)中，具有快速、定性或者定量甚至定位的特點(diǎn)。

  酶標(biāo)板作為ELISA實(shí)驗(yàn)輔助的器材，起著舉足輕重的作用。正確使用酶標(biāo)板可以提高ELISA實(shí)驗(yàn)最終結(jié)果。因此，選擇一款抗原/抗體吸附靈敏度高、對(duì)抗原/抗體吸附能力孔間差異小、批次間差異小的酶標(biāo)板產(chǎn)品，是實(shí)驗(yàn)者獲得可靠、穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果的保障！如何選擇呢？今天，上海通蔚生物帶大家從酶標(biāo)板材質(zhì)、孔型和顏色等分類(lèi)詳細(xì)介紹。

圖1 酶標(biāo)板

  酶標(biāo)板材質(zhì)

  酶標(biāo)板根據(jù)材質(zhì)劃分，可以分為聚苯乙烯（PS）、聚丙烯（PP）和其他材質(zhì)（如聚碳酸酯（PC）等，具有特殊的物理或化學(xué)性質(zhì)）。

  聚苯乙烯（PS）或許對(duì)大多數(shù)實(shí)驗(yàn)小伙伴們比較了解，這種材質(zhì)是實(shí)驗(yàn)使用比較廣泛的材質(zhì)。聚苯乙烯具有疏水性，但可以通過(guò)進(jìn)行表面處理或涂層來(lái)改變其性質(zhì)，以適應(yīng)不同應(yīng)用的不同要求，其特性使其最適合顯微成像和光學(xué)測(cè)量。

  聚苯乙烯由脂肪族碳鏈和懸垂的間歇性苯環(huán)組成。這提供了非常疏水的表面，這種類(lèi)型的微孔板通常被稱(chēng)為“中等結(jié)合”微孔板。關(guān)于中等結(jié)合，我下文會(huì)講到。

  可以通過(guò)表面處理（例如輻射）來(lái)增強(qiáng)結(jié)合能力，輻射會(huì)破壞一定數(shù)量的苯環(huán)，產(chǎn)生羧基(COOH)和羥基(OH)基團(tuán)。這些基團(tuán)的存在為親水相互作用提供了機(jī)會(huì)。以這種方式改性的微孔板通常稱(chēng)為高結(jié)合。所得表面主要是疏水性的，具有間歇性羧基和羥基，能夠與生物分子上帶正電的基團(tuán)發(fā)生離子相互作用。

  聚丙烯(PP)是一種由丙烯單體制成的低密度、抗應(yīng)力熱塑性塑料。這種線性烴樹(shù)脂的化學(xué)式為(C3H6)n。它是由意大利科學(xué)家在20世紀(jì)50年代中期發(fā)現(xiàn)的，如今已成為繼聚乙烯之后產(chǎn)量第二大的塑料。

  聚丙烯是一種熱塑性材料，因此，它可以加熱到熔點(diǎn)，冷卻，然后再次加熱，而不會(huì)發(fā)生任何明顯的劣化。這種特性，加上它在高溫下液化而不是燃燒的能力，是使聚丙烯成為注塑等制造應(yīng)用的熱門(mén)選擇的兩個(gè)關(guān)鍵屬性。這種材料的其他一些特性包括：

  耐化學(xué)性：聚丙烯耐稀堿和酸，非常適合用作盛放清潔溶液等液體的容器。

  韌性：聚丙烯在有限的撓度范圍內(nèi)具有彈性，但它也可以被視為一種堅(jiān)韌的材料，因?yàn)樗谧冃芜^(guò)程的早期經(jīng)歷塑性變形。韌性是指材料吸收能量和彎曲而不開(kāi)裂的能力。

  絕緣：聚丙烯具有高電阻，使其成為電子元件的理想選擇。

  由于其耐化學(xué)性、耐細(xì)菌性和耐蒸汽滅菌性，聚丙烯還用于各種實(shí)驗(yàn)設(shè)備，以下是聚丙烯（PP）比較適合的實(shí)驗(yàn)類(lèi)型：

  細(xì)胞培養(yǎng)：聚丙烯培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶等，因?yàn)槠淠透邷?、耐腐蝕、不易吸附細(xì)胞，可以用于細(xì)胞培養(yǎng)、培養(yǎng)基儲(chǔ)存等。

  離心管：聚丙烯離心管耐高溫，可在高轉(zhuǎn)速離心機(jī)中使用，適合樣品處理、離心分離等實(shí)驗(yàn)。

  移液管：聚丙烯移液管耐化學(xué)腐蝕，可用于吸取各種液體，并且可以進(jìn)行高溫高壓消毒。

  PCR管：聚丙烯PCR管耐高溫，可以在PCR儀中使用，適合核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)。

圖2 96 孔 PCR 微孔板

  其他：聚丙烯材質(zhì)還可用于制作其他實(shí)驗(yàn)器材，例如，滴瓶、試劑瓶、培養(yǎng)皿等。

  需要注意的是，聚丙烯的透光率低，不適合光學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，例如，比色法、熒光法ELISA等。上述為大家介紹比較常見(jiàn)的酶標(biāo)板材質(zhì)，其它的因?yàn)闀r(shí)間關(guān)系，暫時(shí)不介紹，不過(guò)非常喜歡和大家一起交流和分享提高實(shí)驗(yàn)的效率。

  根據(jù)孔型分類(lèi)

  1、孔數(shù)

  微孔板孔數(shù)分為96、48和384孔。實(shí)驗(yàn)中比較常用的96孔，目前市面上大多數(shù)酶標(biāo)儀兼容96孔。

  2、孔底

  根據(jù)微孔板底部分為平底、U型底、V型底。平底折射率較低，適合在酶標(biāo)儀上檢測(cè)；U型底的酶標(biāo)板折射率較高，方便加樣、混勻等操作；V型底部的ELISA板可以準(zhǔn)確吸取樣本。

  3、顏色

  微孔板通常有四種顏色：透明、黑色、白色和灰色。根據(jù)所用的檢測(cè)模式，當(dāng)非常亮和暗的樣本相鄰時(shí)，顏色可能會(huì)影響信號(hào)與背景的比率和孔與孔之間的串?dāng)_。因此，顏色選擇不當(dāng)可能會(huì)對(duì)您的數(shù)據(jù)產(chǎn)生負(fù)面影響。

  吸光度測(cè)定需要使用透明（包括紫外線透明）微孔板，因?yàn)樵诖藱z測(cè)模式下，光必須穿過(guò)樣品。

圖3 透明色微孔板

  黑色微孔板（由于碳的存在而變暗）會(huì)部分抑制樣品的信號(hào)。這是因?yàn)楹谏珪?huì)部分吸收來(lái)自樣品的光信號(hào)。因此，這些板非常適合熒光強(qiáng)度（包括FRET）和熒光偏振測(cè)定。這些通常是具有強(qiáng)信號(hào)產(chǎn)量的檢測(cè)模式，使用黑色有助于減少背景、自發(fā)熒光和孔間串?dāng)_，從而提供更好的信號(hào)空白比。

圖4 白色微孔板

  黑色微孔板通常不推薦用于發(fā)光、時(shí)間分辨熒光(TRF)和TR-FRET檢測(cè)，因?yàn)檫@些檢測(cè)模式通常具有相對(duì)較低的信號(hào)產(chǎn)量，并且會(huì)被黑色進(jìn)一步淬滅。建議使用含有二氧化鈦的白色微孔板進(jìn)行這些檢測(cè)?？椎陌咨糠址从沉藰悠沸盘?hào)，有助于最大化樣品信號(hào)。缺點(diǎn)是白色微孔板也會(huì)增加空白信號(hào)。然而，這在發(fā)光檢測(cè)中通常很低。在TRF中，延遲測(cè)量窗口消除了背景的影響。

圖5 黑色微孔板

  介于黑色和白色之間的中間解決方案是灰色微孔板。這些微孔板特別推薦用于AlphaScreen®和AlphaLISA®，因?yàn)樗鼈兛梢詼p少串?dāng)_和背景，同時(shí)仍提供良好的信號(hào)。

  4、酶標(biāo)板結(jié)合力

  孔的表面特性起著重要作用。在這里，樣品和孔材料相互作用。通常，微孔板主要有三種類(lèi)型：非結(jié)合或低結(jié)合、中結(jié)合和高結(jié)合。結(jié)合受材料物理特性的影響，可以通過(guò)應(yīng)用不同的涂層來(lái)改變。

  對(duì)于生化光譜和高通量篩選應(yīng)用，通常選擇無(wú)涂層的聚苯乙烯作為材料，并歸類(lèi)為中等結(jié)合。

  非結(jié)合板可防止核酸、蛋白質(zhì)和肽與孔表面結(jié)合。此時(shí)，特定涂層可降低檢測(cè)背景并提高信噪比。

  高結(jié)合微孔板通常用于需要將分子固定在孔表面的檢測(cè)。其中最著名的用途之一是ELISA檢測(cè)。在此，特定的涂層和處理會(huì)引入一定數(shù)量的親水基團(tuán)，以促進(jìn)生物分子（例如抗體）的被動(dòng)吸附。中結(jié)合微孔板和高結(jié)合微孔板通常在可用極性基團(tuán)的數(shù)量上有所不同。

  上述為大家介紹酶標(biāo)板的選擇技巧，除了選擇正確酶標(biāo)板之外，酶標(biāo)板使用也非常重要，具體可以參考說(shuō)明書(shū)，了解酶標(biāo)板的注意事項(xiàng)。