40多年來，免疫測定法一直應(yīng)用于醫(yī)療保健行業(yè)、實驗室醫(yī)學(xué)和科學(xué)研究，豐富了人類和動物的生活。臨床免疫測定測試增強(qiáng)了治療選擇，減少了患者住院時間并減輕了疾病的嚴(yán)重程度。

  在生命科學(xué)領(lǐng)域，免疫測定通過監(jiān)測各種蛋白質(zhì)、激素和抗體在研究生物系統(tǒng)方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。在商業(yè)領(lǐng)域，免疫測定有多種用途，包括檢測食品和水中的毒素以及對制造過程中使用的特定分子進(jìn)行質(zhì)量控制監(jiān)測。

  在商業(yè)領(lǐng)域，免疫測定測試用于各種目的，包括檢測食品和水中的毒素以及制造過程中使用的特定分子的質(zhì)量控制監(jiān)測。

  本文上海通蔚生物將為大家介紹免疫測定試劑盒的各個方面、其工作原理及其用途。

  什么是免疫測定？

  免疫測定是一種分子檢測測試，由于其速度快、可靠性高，因此既可用于現(xiàn)場，也可用于實驗室。免疫測定依賴于抗體與分子獨特結(jié)構(gòu)結(jié)合的天然能力，以確保準(zhǔn)確性。因此，它們對于定制抗體生產(chǎn)服務(wù)很有價值。動物在檢測到病原體存在時就會產(chǎn)生抗體和蛋白質(zhì)?？贵w可能存在于體液中，包括血液和組織液，它們可以在與抗原接觸時與抗原結(jié)合。

  抗體之所以特殊，是因為它們只與目標(biāo)抗原或分析物結(jié)合，這是通過根據(jù)抗原的三維框架定制定制抗體來實現(xiàn)的。一旦從人體血液中分離出來，純單克隆和多克隆抗體就可以作為高精度測試試劑，用于監(jiān)測目標(biāo)分子，同時最大限度地減少周圍化合物和化學(xué)物質(zhì)的干擾。

  免疫測定測試的工作原理

  抗體可用于免疫測定測試，以識別血液和其他體液中低濃度的生物標(biāo)志物。這種方法使抗原與新引入的特定抗體結(jié)合，產(chǎn)生免疫反應(yīng)。這指的是選擇性；抗體的目標(biāo)范圍很窄，只與目標(biāo)分析物結(jié)合。免疫測定可以利用抗原和抗體之間的相互作用，用清潔試劑檢測分析物。當(dāng)目標(biāo)分析物存在時，就會發(fā)生顏色變化。所見的顏色代表測試液中目標(biāo)化學(xué)物質(zhì)的濃度。

  免疫測定類型

  1.蛋白質(zhì)印跡法(WB)

  通過電泳根據(jù)給定生物樣本中的蛋白質(zhì)大小進(jìn)行分離，然后將其轉(zhuǎn)移到膜上并用特定抗體染色。利用該技術(shù)，除了檢測感興趣的蛋白質(zhì)外，還可以確定其大小、確認(rèn)是否存在翻譯后修飾或比較不同樣本中的濃度等。

  2.免疫沉淀(IP)

  通過抗原-抗體復(fù)合物的沉淀從樣品中存在的其他成分中分離出某種蛋白質(zhì)。除了檢測和定量蛋白質(zhì)外，其應(yīng)用非常廣泛，包括確定某種抗原的分子量、研究蛋白質(zhì)之間的相互作用或監(jiān)測翻譯后修飾。

  3.放射免疫分析（RIA）

  使用放射性同位素標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物。隨后，讀取放射性來檢測復(fù)合物并確認(rèn)和量化樣本中目標(biāo)蛋白質(zhì)的存在。放射免疫分析法的優(yōu)點之一是它是一種高靈敏度的技術(shù)，可以檢測出樣品中濃度極低的蛋白質(zhì)。然而，它也有一個很大的缺點，那就是使用放射性物質(zhì)存在潛在的危險。

  4.ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定）

  在不同類型的免疫測定中，ELISA因其易于實施、多功能性以及高靈敏度和特異性而成為研究實驗室中最流行和最常用的方法之一。它基于酶的使用，通過添加相應(yīng)的底物催化比色反應(yīng)，可以檢測抗原-抗體連接（從而檢測樣品中是否存在某種抗原）。

  5.CLIA(化學(xué)發(fā)光免疫分析)

  化學(xué)發(fā)光測定或CLIA與ELISA的原理相同，不同之處在于，在這種情況下，抗原-抗體結(jié)合是通過化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的熒光來測量的。CLIA檢測的缺點是需要特定的設(shè)備來讀取熒光，但另一方面，它們的優(yōu)點是靈敏度明顯高于傳統(tǒng)的ELISA。

  6.免疫熒光（IF）

  在免疫熒光測定中，利用熒光團(tuán)可以通過與特定抗體的結(jié)合來檢測目的抗原。

  7.免疫組織化學(xué)(IHC)

  結(jié)合了免疫學(xué)、生物化學(xué)和組織學(xué)技術(shù)，通過使用特異性抗體來檢測組織切片中存在的抗原。此外，它還可以可視化所研究組織內(nèi)抗原的分布和位置。

  8.免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）

  這是一種與免疫組織化學(xué)具有相似基礎(chǔ)的技術(shù)，只是在這種情況下，免疫細(xì)胞化學(xué)可以檢測細(xì)胞內(nèi)的抗原。IHC和ICC的靈敏度略低于ELISA或WesternBlot，但它們允許在完整細(xì)胞或組織的背景下研究抗原，而無需事先將其分離。

  9.流式細(xì)胞術(shù)（FC）

  在各種免疫測定方法中，流式細(xì)胞術(shù)是最復(fù)雜的方法之一。流式細(xì)胞術(shù)是一種測量激光光束散射和反射的方法，根據(jù)細(xì)胞的物理化學(xué)特性對懸浮液中的細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)和分析。

  免疫測定有哪些應(yīng)用？

  免疫測定法因其操作簡單而廣為使用。以下是免疫測定法的一些常見應(yīng)用。

  1.臨床診斷和用藥監(jiān)督

  免疫測定在多種疾病的診斷和治療中發(fā)揮著重要作用。免疫測定用于癌癥診斷、妊娠檢測和治療藥物監(jiān)測，以及定制肽合成等其他應(yīng)用。這些生物分析測定可以評估用于治療癌癥和艾滋病毒的處方藥的療效。此外，它們還用于工作場所的藥物檢測領(lǐng)域。

  2.生物制藥分析

  “生物制藥”是指使用生物過程或材料衍生、生產(chǎn)或創(chuàng)造的藥物和生物試劑。免疫測定是生物制藥研究和開發(fā)的有益工具，例如細(xì)胞療法、基因合成和疫苗。

  3.食品分析

  在生產(chǎn)食品和開發(fā)新食譜時，免疫測定測試經(jīng)常用于識別潛在的有害污染物或過敏原。例如，免疫測定測試可以篩查麩質(zhì)、危險化合物、重金屬中毒或大腸桿菌等病原體。

  4.食物過敏原檢測

  這種檢測至關(guān)重要，因為食物引起的過敏反應(yīng)可能是致命的。有些人的免疫系統(tǒng)對某些食物中的蛋白質(zhì)反應(yīng)異常，導(dǎo)致一種稱為食物過敏的疾病。涉及免疫球蛋白的細(xì)胞介導(dǎo)和抗體介導(dǎo)反應(yīng)都會引起癥狀。牛奶、雞蛋、杏仁、芝麻、小麥和甲殼類動物是常見的過敏食物，可以使用家庭和工作場所提供的眾多免疫測定試劑盒之一進(jìn)行檢測。

  從生產(chǎn)設(shè)備中取出的拭子和對成品食品的測試可用于確定是否存在交叉污染，并確保企業(yè)遵守法律法規(guī)。食物過敏者可以提供人類IgE進(jìn)行免疫學(xué)測試，而多克隆或單克隆動物抗血清可以提供動物IgG和IgY。雖然單克隆抗體被設(shè)計成僅識別一種蛋白質(zhì)或肽，但多克隆抗血清是針對一組蛋白質(zhì)產(chǎn)生的。

  點免疫印跡法或SDS-PAGE可用于定性鑒定食物過敏原，而Rocket免疫電泳法和ELISA可用于定量鑒定隱藏的食物過敏原。點免疫印跡法也是一種定性檢測食物過敏原的方法。ELISA用于鑒定完整的蛋白質(zhì)，但某些ELISA無法檢測蛋白質(zhì)水解物。由于親脂性殘留物很難定位，因此被稱為免疫測定ELISA的殘留檢測方法需要進(jìn)行重大開發(fā)。

  5.霉菌毒素分析

  霉菌毒素是天然存在的毒素，由特定霉菌產(chǎn)生。它們對人類健康有害，對消費者構(gòu)成威脅。黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮和伏馬毒素等毒素都屬于此類有害物質(zhì)。

  如果儲存不當(dāng)，玉米、小麥、大米、燕麥、黑麥、大豆、堅果、水果和香料等農(nóng)產(chǎn)品都可能被霉菌毒素污染。此外，霉菌毒素在收獲和干燥之前可能會進(jìn)入食品和飼料中。基于免疫測定技術(shù)的霉菌毒素檢測技術(shù)問世已有十多年。直接競爭性ELISA測試是檢測霉菌毒素最流行的免疫測定程序。

  6.環(huán)境監(jiān)測

  近年來，免疫測定法已進(jìn)入環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域。免疫測定法有助于檢測環(huán)境污染物。例如，免疫測定法可檢測地下水和地表水中的各種有害物質(zhì)，如PCB（多氯聯(lián)苯）、某些殺蟲劑等。

  免疫測定測試有哪些優(yōu)勢？

  由于其實用性，抗體免疫測定已變得很普遍。使用抗體或免疫測定的方法包括：

  1.經(jīng)濟(jì)

  2.可靠的

  2.足夠靈敏，可以檢測到微量分子

  4.適用于多種化學(xué)工藝和工業(yè)用途

  免疫測定可以識別常規(guī)程序無法檢測到的低濃度重要抗原。免疫測定通?？焖俣_，使臨床醫(yī)生能夠可靠地診斷各種疾病，包括糖尿病、癌癥和心血管疾病。