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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 ： 人外周血樹突狀細(xì)胞(未成熟DC 細(xì)胞)
產(chǎn)品品牌 ： 通蔚生物
組織來源 ： 外周血
產(chǎn)品規(guī)格 ： 5×105cells/T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介
人外周血D C 細(xì)胞分離自外周血，由外周血單核細(xì)胞誘導(dǎo)而成的；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計劃中首次提出外周血這一新概念。
樹突狀細(xì)胞分為成熟樹突狀細(xì)胞和未成熟樹突狀細(xì)胞，典型的未成熟樹突狀細(xì)胞呈半貼壁生長，在G M -C SF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落，細(xì)胞大而形態(tài)不規(guī)則，表面皺褶多，亦可見少量短刺狀突，胞內(nèi)細(xì)胞器豐富并可見吞噬泡，具有較強(qiáng)的遷移能力，伴隨有部分未完全誘導(dǎo)成的單核細(xì)胞，貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹突狀細(xì)胞由未成熟D C 進(jìn)一步經(jīng)T N Fα、LPS等誘導(dǎo)而成，多數(shù)呈懸浮生長，細(xì)胞呈圓形，細(xì)胞體積進(jìn)一步增大，表面大量粗細(xì)不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 )，伴隨少量貼壁未成熟細(xì)胞或者單核細(xì)胞。未成熟D C 細(xì)胞長時間培養(yǎng)也可能導(dǎo)致自發(fā)分化成熟。
D C 細(xì)胞尚無特異性細(xì)胞表面分子標(biāo)志，主要通過形態(tài)學(xué)、組合性細(xì)胞表面標(biāo)志、在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中能激活初始T細(xì)胞等特征進(jìn)行鑒定。其中成熟樹突狀細(xì)胞表面高表達(dá)主要組織相容性復(fù)合物(M H C )以及C D 80、C D 86等共刺激分子，進(jìn)而激活T淋巴細(xì)胞，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，處于啟動、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)；未成熟樹突狀細(xì)胞具有很強(qiáng)的抗原攝取加工能力，但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細(xì)胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應(yīng)答，不能激活T細(xì)胞的第二信號，可導(dǎo)致T細(xì)胞無能，從而誘導(dǎo)免疫低反應(yīng)或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細(xì)胞表面C D 80、C D 86、M H C -Ⅱ類分子等共刺激分子表達(dá)較低，一般在30% 以下。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的人外周血未成熟D C 細(xì)胞采用密度梯度離心法分離外周血單個核細(xì)胞、培養(yǎng)過程添加細(xì)胞因子誘導(dǎo)而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶 。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實驗室分離的人外周血樹突狀細(xì)胞(未成熟D C 細(xì)胞)經(jīng)C D 86免疫熒光鑒定、 細(xì)胞形態(tài)等綜合鑒定，純度可達(dá)80% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ： 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 半貼半懸浮
細(xì)胞形態(tài) ： 圓形、梭形、多角形，形態(tài)多樣
傳代特性 ：屬于高度分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群
傳代比例 ： 不傳代
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
人外周血樹突狀細(xì)胞(未成熟D C 細(xì)胞)體外培養(yǎng)周期有限；建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細(xì)胞電子版照片
使用方法
人外周血樹突狀細(xì)胞(未成熟D C 細(xì)胞)是一種半貼半懸浮細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈圓形、梭 形、多角形，形態(tài)多樣，在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞屬于高度分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實驗。
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1.取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2.半貼壁半懸浮細(xì)胞處理
1) 收集T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50ml離心管中，用吸管吸取PBS，吹洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶1-2次，收集清洗液；經(jīng)1200-1500rpm 離心3min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀①。
2) 添加0.25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3)用吸管輕輕吹打混勻，收集細(xì)胞懸液至離心管中；經(jīng)1200-1500rpm 離心3min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀②。
4) 吸取5ml新鮮完全培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞沉淀①、細(xì)胞沉淀②,把①、②混勻。
5) 用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞，按實驗需求接種于實驗器皿內(nèi)，然后補(bǔ)充適量新鮮的
完全培養(yǎng)基，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
6) 待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，用于實驗；可以每2-3天換液一次新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞實驗
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1m g/m l），明膠（0.1% ），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
