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雙酰胺多殘III(DM III)ELISA試劑盒
簡介
雙酰胺多殘，是一類以芳香環(huán)為核心，在芳香環(huán)的2個不同位點分別連接一個酰胺鍵的活性分子。第一個登記（2007年）的代表品種是日本農(nóng)藥株式會社研發(fā)的氟苯蟲酰胺。此類殺蟲劑作用靶標(biāo)新穎，為昆蟲魚尼丁受體，具有優(yōu)良的胃毒作用兼具一定的觸殺活性，對鱗翅目昆蟲有很好的防治效果，對卵和幼蟲作用效果更佳，對作物藥害風(fēng)險小，且使用劑量低。此外，由于昆蟲與其他生物間魚尼丁受體存在差異，雙酰胺類殺蟲劑具有優(yōu)秀的選擇毒性，對哺乳動物、鳥類、蜜蜂、魚類低毒；與傳統(tǒng)的殺蟲劑無交互抗性。本酶聯(lián)免疫檢測試劑盒可以經(jīng)濟、快速地檢測樣品中的雙酰胺多殘的含量。
檢測原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中雙酰胺多殘和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭雙酰胺多殘抗體，加入酶標(biāo)二抗后，形成包被抗原-抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物。隨后結(jié)合的酶催化TMB底物顯色，樣本吸光值與其含有的雙酰胺多殘成負(fù)相關(guān)。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可準(zhǔn)確定量樣品中雙酰胺多殘的含量。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算所得值乘以樣品處理的稀釋倍數(shù)即為實際樣品中雙酰胺多殘的含量。
需要的其他材料
1. 酶標(biāo)儀，包含450nm測定波長，同時包含600-680nm校正波長更佳；
2. 移液器及槍頭；
3. 蒸餾水或去離子水；
4. 100-1000mL刻度量筒；
5. 洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機；
6. 水平軌道微孔板振蕩器，能夠保持500±50 rpm的速度；
7. 用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的試管。
試劑準(zhǔn)備
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
洗滌液/稀釋液配置
如果洗滌液/稀釋液（20×）有晶體析出，需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋（例如：1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水）
標(biāo)準(zhǔn)品配置
試劑盒中取出標(biāo)準(zhǔn)品，準(zhǔn)備7個試管，先將4000ppb標(biāo)準(zhǔn)品（200μL）按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至365ppb（例：91μL的標(biāo)準(zhǔn)品母液+909μL的1×稀釋液，制備得到1000μL的365ppb濃度標(biāo)準(zhǔn)品），隨后在6個試管中分別加入600μL的1×稀釋液，在這6個單獨的試管中將365ppb標(biāo)準(zhǔn)品依次3倍倍比稀釋至7個梯度，共配制7個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，依次為：365ppb、121.6ppb、40.5ppb、13.5ppb、4.5ppb、1.5ppb、0.5ppb，從最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吸取300μL標(biāo)準(zhǔn)品到下一個試管中，輕輕吹打混勻，以此類推進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋（如圖所示），1×稀釋液用作零濃度標(biāo)準(zhǔn)品(0ppb)。
一抗工作液配置
使用前10分鐘，用1×稀釋液將100×一抗工作液稀釋成1×一抗工作液，根據(jù)所需用量配置。
酶標(biāo)二抗工作液配置
使用前10分鐘，用1×稀釋液將100×酶標(biāo)二抗稀釋成1×酶標(biāo)抗體工作液，根據(jù)所需用量配置。
備 注：如樣本中待測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值，請根據(jù)實際情況選擇適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù) (建議：將待測樣本用樣品稀釋液最低稀釋1倍，在正式實驗之前做預(yù)實驗，以確定具體稀釋倍數(shù)) ；標(biāo)準(zhǔn)品母液及100×酶標(biāo)二抗溶液根據(jù)實驗所需酶標(biāo)板孔數(shù)吸取一定量配制工作液，剩余溶液應(yīng)放回-20℃儲存，且避免反復(fù)凍融。（若實驗在1-2周內(nèi)做完，標(biāo)準(zhǔn)品母液及100×酶標(biāo)抗體置于2-8℃保存；若實驗為長時間跨度實驗，建議將標(biāo)準(zhǔn)品母液及100×酶標(biāo)抗體置于-20℃保存，以保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性）
結(jié)果的計算
計算標(biāo)準(zhǔn)品和樣本復(fù)孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(作圖時去掉空白組的值)。或者使用能夠生成四參數(shù)邏輯（4-P）曲線擬合的計算機軟件來創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
精密度
批內(nèi)精密度 ：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在同一個板塊內(nèi)精度評估。
批內(nèi)變異系數(shù) CV%小于10%。
批間精密度 ：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在不同板塊內(nèi)精度評估。
批間變異系數(shù) CV%小于15%。
回收率
樣本回收率：80% - 120%
靈敏度
經(jīng)樣本測試，本試劑盒的檢測靈敏度為0.5 ppb。
線性關(guān)系
校準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù) r 值，大于等于0.9980。
本ELISA試劑盒實驗計算和曲線圖，請您下載產(chǎn)品說明書(供參考），本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷和治療。
