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產(chǎn)品中心

  • 寨卡病毒探針法qRT-PCR試劑盒

    規(guī)格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW-E10376
    • 應(yīng)用 : 僅限于科研使用
    • 貨期 : 1年
    • 規(guī)格 :50T
  • 商品詳情
  • 參考文獻(xiàn)
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產(chǎn)品及特點(diǎn)

寨卡病毒(Zika Virus)屬黃病毒科,黃病毒屬,單股正鏈RNA病毒,是一種通過蚊蟲進(jìn)行傳播的蟲媒病毒。該病毒感染后癥狀與登革熱相似,包括發(fā)燒、疹子、關(guān)節(jié)疼痛、肌肉疼痛、頭痛和結(jié)膜炎(紅眼)。寨卡病毒感染者中,只有約20%會(huì)表現(xiàn)輕微癥狀,如發(fā)燒、皮疹、關(guān)節(jié)疼痛和結(jié)膜炎等,癥狀通常不到一周即可消失。然而,如果孕婦感染,胎兒可能會(huì)受到影響,導(dǎo)致新生兒小頭癥甚至死亡。因此檢測寨卡病毒有重要的意義。本產(chǎn)品就是以探針法qRT-PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測寨卡病毒RNA的試劑盒,它具有下列特點(diǎn):

1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,分析靈敏性高,可以達(dá)到100拷貝/反應(yīng)。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)寨卡病毒RNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他生物的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測,又可用于定量檢測。用于定量檢測時(shí)線性范圍至少為5各數(shù)量級。
6. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法qRT-PCR反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。

規(guī)格及成分

成分

規(guī)格

包裝

探針法qRT-PCR緩沖液

0.5mL

0.5mL藍(lán)蓋管

探針法qRT-PCR酶混合液v2

50μL

0.5mL紅蓋管

熒光PCR專用模板稀釋液

1mL

1.5mL綠蓋管

寨卡病毒qRT-PCR引物-探針干粉

50次

1.5mL棕色管

寨卡病毒qRT-PCR陽性對照(1×10E7拷貝/μL)

50μL

0.5mL黃蓋管

使用手冊

1份

本產(chǎn)品采用五孔盒包裝

意:引物-探針干粉在使用前需要短暫離心,然后在離心管中加入162uL的超純水充分混勻后再使用,未用完的需要-20℃保存。


使用方法

稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例

由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的RNA片段作為陽性對照。如果需要RNA陽性樣品,需要另外訂購。

1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為6,5,4,3,2,1。

2. 用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR專用模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。
3. 在6號管中加入5μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在5號管中加入5μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在4號管中加入5μL 1×10E5拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個(gè)樣品,設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽性對照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次樣本制備所要求的起始樣本體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的RNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)RNA提取試劑盒兼容,也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
Probe qPCR反應(yīng)20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)RT-PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于RT-PCR陰性對照(用水做模板),6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+4個(gè)RT-PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于RT-PCR陰性對照(用水做模板),1個(gè)用于RT-PCR陽性對照(直接用第6步第4號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

數(shù)據(jù)處理
1. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA濃度的log值,再推算出其濃度。
2. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照Ct必須沒有讀數(shù),或者大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴(kuò)增曲線,Ct值應(yīng)該小于40。對待測樣品,如果其Ct沒有讀數(shù)、大于或等于40則均為陰性,如果小于40則為陽性。

自備試劑
樣品RNA
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期1年
產(chǎn)品掃碼查看詳情
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