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大腸桿菌探針法LAMP試劑盒
產(chǎn)品及特點
大腸桿菌（Escherichia coli，E. coli）為埃希氏菌屬（Escherichia）代表菌。一般多不致病，為人和動物腸道中的常居菌，在一定條件下可引起腸道外感染。但某些血清型菌株的致病性強，引起腹瀉，統(tǒng)稱致病性大腸桿菌，又叫致瀉性大腸桿菌，根據(jù)致病性的不同，這些致瀉性大腸埃希菌被分為五種。檢測致病性和非致病性大腸桿菌是食品行業(yè)（包括飲用水）的一個重要的安全指標，因此對致病性和非致病性大腸桿菌的快速準確鑒定有重要作用，為此本公司根據(jù)獨有的探針法LMAP技術，開發(fā)了簡單快捷的大腸桿菌LAMP檢測試劑盒，它具有下列特點：
產(chǎn)品及特點
大腸桿菌（Escherichia coli，E. coli）為埃希氏菌屬（Escherichia）代表菌。一般多不致病，為人和動物腸道中的常居菌，在一定條件下可引起腸道外感染。但某些血清型菌株的致病性強，引起腹瀉，統(tǒng)稱致病性大腸桿菌，又叫致瀉性大腸桿菌，根據(jù)致病性的不同，這些致瀉性大腸埃希菌被分為五種。檢測致病性和非致病性大腸桿菌是食品行業(yè)（包括飲用水）的一個重要的安全指標，因此對致病性和非致病性大腸桿菌的快速準確鑒定有重要作用，為此本公司根據(jù)獨有的探針法LMAP技術，開發(fā)了簡單快捷的大腸桿菌LAMP檢測試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供DNA樣品。
2. 恒溫擴增，簡單快捷。
3. 含熒光探針，擴增的專一性比染料法和電泳法更強。
4. 檢測靈敏性一般比PCR高10倍以上。
5. 一般30分鐘內(nèi)出結果，比PCR快。
6. 上樣量大，對20 μL的反應體系，樣品加樣量高達到14 μL。
7. 內(nèi)含的dUTP-UNG可防交叉污染。
8. 提供無傳染性的陽性對照，便于分析實驗結果。
9. 本產(chǎn)品只能用于定性分析，不推薦用于定量分析。
10. 本產(chǎn)品足夠50次20 μL體系的探針法LAMP擴增。
11. 只可用于科研。
規(guī)格及成分
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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4×LAMP MasterMix （探針法，待加酶） |
200μL |
0.5mL綠蓋管 |
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Bst DNA聚合酶2.0 |
50μL |
0.5mL紅蓋管 |
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20×大腸桿菌LAMP引物-探針干粉 |
50次 |
0.5mL棕色管 |
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大腸桿菌LAMP陽性對照（1E4拷貝/μL） |
250μL |
0.5mL黃蓋管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL藍蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
無 |
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本產(chǎn)品采用5孔盒包裝 |
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注 意：引物干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入110 μL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
樣品DNA的制備
樣品DNA的制備
1. 用自選方法純化樣品DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)DNA提取試劑盒兼容，包括本公司的免提取的核酸釋放劑。
2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個樣品制備，包括一個樣品制備陽性對照（PC）和一個樣品制備陰性對照（NC）。PC用10 μL本試劑盒提供的陽性對照（1E4拷貝/μL）加一定量的水作為樣品制備PC，加水后的總體積跟所用核酸純化試劑盒所要求的起始樣本體積一致。NC用水替代。
LAMP反應20μL體系
3. 反應設置：第一次使用時請把所有Bst DNA聚合酶2.0（50μL，本試劑盒提供）加入到 4×LAMP MasterMix（探針法，待加酶）中，輕柔顛倒 20 次充分混勻，然后再取用。如果有N+2個DNA純化樣品，則設置N+4個LAMP擴增，增加LAMP擴增陽性對照和LAMP擴增陰性對照各1個。
4. 置于熒光定量PCR儀中65℃保溫60分鐘進行擴增，每分鐘在Cy5通道采集一次熒光信號。
結果分析
結果分析
5. 樣品制備陽性對照和LAMP陽性對照的反應液將有標準的S擴增曲線，樣品制備陰性對照和LAMP陰性對照的反應液將沒呈平線，沒有S曲線，否則提取實驗或擴增實驗無效。如果陽性和陰性對照結果正常，則實驗有效，可以分析樣品的情況。樣品管的熒光曲線為S型，則說明樣品為陽性，如果為平線則說明待測樣品為陰性。典型的熒光檢測結果見下圖。左邊為陽性，右邊為陰性。
自備試劑
待測樣品
待測樣品
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期2年
低溫運輸，-20℃保存，有效期2年
