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產(chǎn)品中心

  • 單純皰疹病毒探針法qPCR試劑盒

    規(guī)格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW-E10541
    • 應(yīng)用 : 僅限于科研使用
    • 貨期 : 2年
    • 規(guī)格 :50T
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產(chǎn)品及特點

單純皰疹病毒(Herpes Simplex Virus,HSV)是圓形病毒,具有雙鏈線性的DNA,全長約125—240kb。根據(jù)單純皰疹病毒抗原性質(zhì)的不同分為兩個亞型:即HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ。HSV-Ⅰ主要侵犯面、腦及腰以上部位,HSV-Ⅱ主要侵犯生殖器及腰以下部位。正常人可作為病毒攜帶者。人是單純皰疹病毒惟一的自然宿主,70%~90%的成人皆曾感染過HSV-Ⅰ。病毒經(jīng)過口腔、呼吸道、生殖器以及皮膚破損處侵入體內(nèi),潛居于人體正常黏膜、血液、唾液、神經(jīng)組織及多數(shù)器官內(nèi)。單純皰疹病毒的流行給人類的生活帶來很大的困擾,因此快速檢測單純皰疹病毒具有重要意義。本產(chǎn)品是以探針法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測單純皰疹病毒的試劑盒,它具有下列特點:

1. 即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,分析靈敏性高,可以達到100拷貝/反應(yīng)。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)單純皰疹病毒DNA高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟其他病毒的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 涵蓋性廣,尤其是能檢查危害人類健康的幾種單純皰疹病毒。
6. 既可用于定性檢測,又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5
個數(shù)量級。
7. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應(yīng)。
8. 本產(chǎn)品只能用于科研。

規(guī)格及成分

成分

規(guī)格

包裝

2×Probe qPCR MasterMix

0.5mL

0.5mL本色

熒光PCR專用模板稀釋液

1mL

1.5mL綠蓋管

超純水

1mL

1.5mL藍蓋管

單純皰疹病毒qPCR引物-探針干粉

50次

0.5mL棕色管

單純皰疹病毒qPCR陽性對照(1×10E7拷貝/μL)

50μL

0.5mL黃蓋管

使用手冊

1份

本產(chǎn)品采用五孔盒包裝

意:引物-探針干粉在使用前需要短暫離心,然后在離心管中加入162mL的超純水充分混勻后再使用,未用完的需要-20℃保存。


使用方法

稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,
本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個離心管,分別為6,5,4,3,2,1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR專用模板稀釋液,好用帶芯槍頭,下同)。
3. 在6號管中加入5μL1×10E7拷貝/μL的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在5號管中加入5μL1×10E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在4號管中加入5μL1×10E5拷貝/μL的陽性對照(上步所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

樣品DNA的制備
7. 如果有N個樣品,好設(shè)置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。
8. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)樣品DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
Probe qPCR反應(yīng)20 μL體系,在樣品制備室進行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),6個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+4個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),1個用于PCR陽性對照(直接用第6步第4號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

數(shù)據(jù)處理
1. 如果擴增陽性對照或制備陽性對照結(jié)果為陰性,則整個擴增或制備實驗無效,不需要分析數(shù)據(jù),需要重做擴增或制備或跟廠家聯(lián)系。如果擴增陰性對照或制備陰性對照結(jié)果為陽性,說明環(huán)境污染,則整個擴增或制備實驗無效,不需要分析數(shù)據(jù),需要跟廠家聯(lián)系,購買新的引物和探針。
2. 如果陰性對照和陽性對照正常,則實驗有效,可以進入后續(xù)分析。
3. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,再推算出其濃度。
4. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照必須無Ct或Ct大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct值應(yīng)該小于40,否則實驗無效。如果實驗有效,則分析待測樣品,如果無Ct或Ct大于或等于40,則為陰性。如果Ct小于40則為陽性。

自備試劑
樣品DNA,超純水,核酸純化試劑盒。
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,有效期2年
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