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021-54845833/15800441009
馬皰疹病毒4型(Equine Herpesvirus Type 4，EHV-4)是一種雙鏈DNA病毒，基因組長(zhǎng)145 kb。EHV-4 經(jīng)常和EHV-1混合感染馬屬動(dòng)物，引起發(fā)燒、厭食、鼻腔粘性膿性鼻液體，病變發(fā)生在呼吸道粘膜表面，還可涉及到肺部。由于EHV-4主要表現(xiàn)為呼吸道癥狀，在馬匹運(yùn)輸過程中，EHV-4的接觸性傳播更為廣泛，對(duì)馬屬動(dòng)物產(chǎn)業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，因此快速檢測(cè)馬皰疹病毒4型具有重要的意義。為此，本公司以探針法qPCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)了馬皰疹病毒4型的檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
成分
規(guī)格
包裝
2×Probe qPCR MasterMix
0.5mL
0.5mL本色管
熒光PCR專用模板稀釋液
1mL
1.5mL綠蓋管
超純水
1mL
1.5mL藍(lán)蓋管
馬皰疹病毒4型qPCR引物-探針干粉
50次
0.5mL棕色管
馬皰疹病毒4型qPCR陽性對(duì)照(1E7拷貝/μL)
50μL
0.5mL黃蓋管
使用手冊(cè)
1份
無
本產(chǎn)品采用五孔盒包裝
注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入165 μL的超純水充分混勻后得到引物-探針混合液再使用，未用完的需要-20℃保存。
使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6、5、4、3、2、1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。
3. 在6號(hào)管中加入5 μL 1E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1E6拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號(hào)管中加入5 μL 1E5拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個(gè)樣品，設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0 μL上步所得第4號(hào)稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次樣本制備所要求的起始樣本體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)DNA提取試劑盒兼容，也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
Probe qPCR反應(yīng)20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板），6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板），1個(gè)用于PCR陽性對(duì)照（直接用第6步第4號(hào)管的陽性對(duì)照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
樣品DNA，超純水，核酸純化試劑盒
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
