產(chǎn)品及特點(diǎn)
奇異變形桿菌(Proteus mirabilis)是變形桿菌屬的一種革蘭氏染色陰性的主要病原菌。和摩根變形桿菌相似，經(jīng)常存在于人糞便中，常由腸源性引起尿路感染。在普遍使用廣譜抗生素后，變形桿菌已成為重要的條件致病菌，有時(shí)引起人類(lèi)的嚴(yán)重感染，包括醫(yī)源性感染，每每造成死亡。奇異變形桿菌是僅次于大腸埃希菌的泌尿系統(tǒng)感染的主要病原菌，腎結(jié)石和膀胱結(jié)石的形成可能與之感染有關(guān)，有的菌株可引起敗血癥、食物中毒、腹膜炎、腦膜炎等。因此快速檢測(cè)奇異變形桿菌具有重要意義。本產(chǎn)品就是以TaqMan探針?lè)晒舛縋CR技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的專(zhuān)門(mén)檢測(cè)奇異變形桿菌的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到100拷貝/mL。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)奇異變形桿菌DNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測(cè)，又可用于定量檢測(cè)。用于定量檢測(cè)時(shí)線性范圍至少為5個(gè)數(shù)量級(jí)。
6. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針?lè)晒舛縋CR反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
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成分
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規(guī)格
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包裝
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2×Probe qPCR MasterMix
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0.5mL
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1mL本色管
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熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液
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1mL
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1.5mL綠蓋管
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超純水
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1mL
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1.5mL藍(lán)蓋管
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奇異變形桿菌探針?lè)?/span>qPCR引物-探針混合干粉
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50次
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0.5m 棕色管
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奇異變形桿菌探針?lè)?/span>qPCR陽(yáng)性對(duì)照(1×10E7拷貝/μL)
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50μL
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0.5mL黃蓋管
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使用手冊(cè)
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1份
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無(wú)
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝
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注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入162μL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。
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使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以10E1-10E6拷貝/ μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2，1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同。
3. 在6號(hào)管中加入5 μL1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5μL1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號(hào)管中加入5μL 1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個(gè)樣品，設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0μL上步所得4號(hào)稀釋液再加上一定量的水使總體積跟核酸制備試劑盒所要求的起始樣本體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)DNA提取試劑盒兼容。
Probe qPCR反應(yīng)20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板），6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板），1個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照（用第4號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
數(shù)據(jù)處理
1. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
2. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照必須無(wú)Ct或Ct大于或等于40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于40，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。如果實(shí)驗(yàn)有效，則分析待測(cè)樣品，如果無(wú)Ct或Ct大于或等于40，則為陰性。如果Ct小于40則為陽(yáng)性。
自備試劑
樣品DNA
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
購(gòu)物車(chē)
幫助
021-54845833/15800441009
