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產(chǎn)品中心

  • 人Kra基因c.34GT(p.G12C)突變探針法qPCR檢測試劑盒

    規(guī)格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW-E10230
    • 應(yīng)用 : 僅限于科研使用
    • 貨期 : 1年
    • 規(guī)格 :50T
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人Kra基因c.34GT(p.G12C)突變探針法qPCR檢測試劑盒

產(chǎn)品及特點
KRAS基因的全名叫Kirsten Rat Sarcoma Viral Oncogene Homolog,(Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物),它編碼一種小GTP酶,該酶屬于RAS超蛋白家族。KRAS基因位于1號染色體上。大約有30%的癌癥患者都存在KRAS突變,其中包括90%的胰腺癌,50%的結(jié)腸癌和25%的肺癌。在非小細(xì)胞肺癌中,KRAS基因突變占20~30%,多存在于肺腺癌中,肺鱗癌中比較罕見。在KRAS突變類型中,c.34G>T(p.G12C)突變最常見,約占所有KRAS突變的44%,最常見的癌種是非小細(xì)胞肺癌,因此快速檢測此突變具有重要的意義。為此本公司開發(fā)了簡單快捷的檢測該位點的點突變探針法qPCR檢測試劑盒,它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,分析靈敏性高,可以達(dá)到1000拷貝/μL。
3. 能檢測出5%的點突變。
4. 提供兩種陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
5. 特異性高,引物是根據(jù)人Kras基因rs121913530位點設(shè)計,不會跟其他位點的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能定性,不能定量。
7. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的點突變探針法熒光定量PCR反應(yīng)。
8. 本產(chǎn)品只能用于科研。

規(guī)格及成分

成分

規(guī)格

包裝

2×點突變Probe qPCR MasterMix

0.5mL

0.5mL本色管

超純水

1mL

1.5mL藍(lán)蓋管

rs121913530位點檢測引物-探針混合液干粉

50次

0.5 mL白色管

rs121913530位點GG陽性對照(1×10E4拷貝/μL)

250 μL

1.5mL棕色管

rs121913530位點TT陽性對照(1×10E4拷貝/μL)

250 μL

0.5mL黃蓋管

使用手冊

1份

本產(chǎn)品采用五孔盒包裝


使用方法
樣品DNA的制備
1. 如果有N個樣品,則進(jìn)行N次純化,得到的DNA最后溶解在TE中,并需要用NanoDrop進(jìn)行定量。最后的濃度不能低于0.2ug/μL。
2. 本試劑盒跟市場上大多數(shù)樣品DNA提取試劑盒兼容。
點突變Probe qPCR反應(yīng)20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行
3. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+3個PCR管,其中N個用于上步得到的N樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板,NC),3個用于陽性對照(分別對應(yīng)兩種純合子基因型和一種雜合子基因型)。
4. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加。


數(shù)據(jù)處理

1. 一般的熒光定量PCR儀在基因分型的模式下,都可以自動根據(jù)兩個通道獲得的熒光值,計算每個樣品的比值(HEX值/FAM值),并描出散點圖。突變基因型的比值點將位于散點圖的X軸方向,正常基因型的比值將位于Y軸方向,雜合子基因型的比值將位于中間,陰性對照的比值將位于原點附近。如果陰性對照有任何信號,則表示污染,本次實驗無效,需要尋找原因。

2. 也可以手動整理下表進(jìn)行基因型判斷。首先設(shè)置閾值,F(xiàn)AM的閾值根據(jù)GG陽性對照的FAM熒光值設(shè)置,HEX的閾值根據(jù)TT陽性對照的HEX熒光值設(shè)置。如果陰性對照有任何信號,則表示污染,本次實驗無效,需要尋找原因。如果實驗有效,則分析樣品。如果樣品Ct值低于35,則算有擴增。高于35,則算無擴增。

自備試劑
樣品DNA
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,有效期1年
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