購(gòu)物車
幫助
021-54845833/15800441009
人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒R家族探針法qRT-LAMP試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒（Human Endogenous Retroviruses，HERV）是人類基因組中的一部分，它們?cè)醋杂陟`長(zhǎng)類動(dòng)物進(jìn)化歷程中遭遇的外源性逆轉(zhuǎn)錄病毒。這些古老的病毒序列約占人類基因組的8%。在這些人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒中，人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒R家族（Human Endogenous Retroviruses R family ，HERV-R）尤為典型，它們?cè)谌祟惢蚪M中留下了約50個(gè)不同的拷貝。研究表明，人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒R家族序列在特定人體組織中顯示出較高的RNA表達(dá)水平，特別是在那些依賴激素的器官和細(xì)胞、具有融合功能的組織，以及那些與外界環(huán)境直接接觸的組織中。這些發(fā)現(xiàn)揭示了人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒R家族在人類生物學(xué)中的潛在作用，尤其是在生殖、免疫反應(yīng)和神經(jīng)系統(tǒng)功能等方面，因此快速靈敏診斷IPNV具有重要意義。為此本公司根據(jù)探針法qRT-LMAP技術(shù)，開發(fā)了簡(jiǎn)單快捷的人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒R家族qRT-LAMP檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
產(chǎn)品及特點(diǎn)
人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒（Human Endogenous Retroviruses，HERV）是人類基因組中的一部分，它們?cè)醋杂陟`長(zhǎng)類動(dòng)物進(jìn)化歷程中遭遇的外源性逆轉(zhuǎn)錄病毒。這些古老的病毒序列約占人類基因組的8%。在這些人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒中，人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒R家族（Human Endogenous Retroviruses R family ，HERV-R）尤為典型，它們?cè)谌祟惢蚪M中留下了約50個(gè)不同的拷貝。研究表明，人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒R家族序列在特定人體組織中顯示出較高的RNA表達(dá)水平，特別是在那些依賴激素的器官和細(xì)胞、具有融合功能的組織，以及那些與外界環(huán)境直接接觸的組織中。這些發(fā)現(xiàn)揭示了人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒R家族在人類生物學(xué)中的潛在作用，尤其是在生殖、免疫反應(yīng)和神經(jīng)系統(tǒng)功能等方面，因此快速靈敏診斷IPNV具有重要意義。為此本公司根據(jù)探針法qRT-LMAP技術(shù)，開發(fā)了簡(jiǎn)單快捷的人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒R家族qRT-LAMP檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒RNA樣品。
2. 恒溫?cái)U(kuò)增，反應(yīng)設(shè)置更加簡(jiǎn)單。
3. 含熒光探針，可以對(duì)擴(kuò)增進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)（需要熒光PCR儀）。
4. 檢測(cè)靈敏性一般比RT-PCR高10倍以上。
5. 特異性高，引物是根據(jù)人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒R家族RNA保守序列設(shè)計(jì)的，不會(huì)跟其他型別埃柯病毒及其他生物的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
6. 一般30分鐘內(nèi)出結(jié)果，比qRT-PCR快。
7. 提供無傳染性的陽(yáng)性對(duì)照，便于分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
8. 上樣量大，對(duì)20 μL的反應(yīng)體系，樣品加樣量高達(dá)到14 μL。
9. 內(nèi)含的dUTP-UNG可防交叉污染。
10. 本產(chǎn)品足夠50次20 μL體系的探針法qRT-LAMP擴(kuò)增。
11. 本產(chǎn)品只可用于科研。
規(guī)格及成分
規(guī)格及成分
|
成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
|
RT-LAMP MasterMix（探針法待加酶） |
200μL |
0.5mL本色蓋 |
|
逆轉(zhuǎn)錄酶-擴(kuò)增酶混合液 |
100μL |
0.5mL紅蓋管 |
|
20×人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒R家族探針法qRT-LAMP引物-探針干粉 |
50次 |
0.5mL白蓋管 |
|
人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒R家族陽(yáng)性對(duì)照（1E7拷貝/μL） |
250μL |
0.5mL黃蓋管 |
|
超純水 |
1mL |
1.5mL藍(lán)蓋管 |
|
使用手冊(cè) |
1份 |
無 |
|
本產(chǎn)品采購(gòu)五孔盒包裝 |
||
|
注 意：引物干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入55 μL的超純水充分混勻和再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
||
使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無傳染性的RNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。如果需要RNA陽(yáng)性樣品，需要另外訂購(gòu)。
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無傳染性的RNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。如果需要RNA陽(yáng)性樣品，需要另外訂購(gòu)。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2，1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。
3. 在6號(hào)管中加入5 μL 1E7拷貝/mL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1E6拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號(hào)管中加入5 μL 1E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
樣品RNA的制備
7. 用自選方法純化樣品RNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)RNA提取試劑盒兼容，包括本公司的免提取的核酸釋放劑。
8. 如果有N個(gè)樣品，則需要做N+2個(gè)樣品制備，包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì)照（PC）和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照（NC）。PC用10 μL本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照（1E7拷貝/μL）加一定量的水充當(dāng)，總體積必須核酸純化試劑盒所要求的起始樣品體積一樣，NC用水替代。
探針法qRT-LAMP反應(yīng)20μL體系
9. 注意：第一次使用一個(gè)新的試劑盒時(shí)，必須先將100 μL逆轉(zhuǎn)錄酶-擴(kuò)增酶混合液全部加入到qRT-LAMP MasterMix（探針法，待加酶）中，蓋上蓋子后輕柔顛倒1分鐘混勻，然后再取用。如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)RT-LAMP管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于RT-LAMP陰性對(duì)照（用水做模板），6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。
10. 反應(yīng)設(shè)置：如果有N+2個(gè)RNA純化樣品，則設(shè)置N+4個(gè)qRT-LAMP擴(kuò)增，增加qRT-LAMP陰性對(duì)照和qRT-LAMP陽(yáng)性對(duì)照各1個(gè)。
11．本產(chǎn)品必須使用熒光PCR儀器進(jìn)行擴(kuò)增。設(shè)置60次循環(huán)，每次循環(huán)65℃保溫1分鐘，采集FAM通道的熒光信號(hào)。
結(jié)果分析
1. 若只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照Ct值必須沒有讀數(shù)，或者大于或等于40。樣品制備陽(yáng)性對(duì)照和qRT-LAMP陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有標(biāo)準(zhǔn)的S擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于40。樣品制備陰性對(duì)照和qRT-LAMP陰性對(duì)照Ct值必須沒有讀數(shù)、大于或等于40，如果小于40則為陽(yáng)性。
2. 如果陽(yáng)性和陰性對(duì)照結(jié)果正常，則實(shí)驗(yàn)有效，可以分析樣品的情況。
若把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA濃度的log值，再推算出其濃度。
自備試劑
待測(cè)樣品
待測(cè)樣品
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
