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十足目虹彩病毒1型探針?lè)↙AMP試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
十足目虹彩病毒1型（Decapod Iridescent Virus 1,DIV1），又叫蝦虹彩病毒，是近幾年來(lái)威脅羅氏沼蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的重要病害之一，可感染南美白對(duì)蝦、羅氏沼蝦、紅螯螯蝦等蝦類，且具有不同的外觀癥狀。其中，在羅氏沼蝦上，典型的特征是額劍基部甲殼出現(xiàn)一塊白色三角形區(qū)域，稱為“白點(diǎn)”，部分蝦有空腸空胃、肝胰腺萎縮等癥狀。在水產(chǎn)研究所長(zhǎng)期性病原監(jiān)測(cè)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，蝦虹彩病毒攜帶率較高，具有感染性強(qiáng)、致死率高的特點(diǎn)，且呈現(xiàn)出逐年增長(zhǎng)的趨勢(shì)。因此對(duì)十足目虹彩病毒1型的快速準(zhǔn)確鑒定有重要意義。本公司根據(jù)獨(dú)自開(kāi)發(fā)的探針?lè)↙MAP技術(shù)，開(kāi)發(fā)了簡(jiǎn)單快捷的十足目虹彩病毒1型探針?lè)↙AMP檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
十足目虹彩病毒1型（Decapod Iridescent Virus 1,DIV1），又叫蝦虹彩病毒，是近幾年來(lái)威脅羅氏沼蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的重要病害之一，可感染南美白對(duì)蝦、羅氏沼蝦、紅螯螯蝦等蝦類，且具有不同的外觀癥狀。其中，在羅氏沼蝦上，典型的特征是額劍基部甲殼出現(xiàn)一塊白色三角形區(qū)域，稱為“白點(diǎn)”，部分蝦有空腸空胃、肝胰腺萎縮等癥狀。在水產(chǎn)研究所長(zhǎng)期性病原監(jiān)測(cè)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，蝦虹彩病毒攜帶率較高，具有感染性強(qiáng)、致死率高的特點(diǎn)，且呈現(xiàn)出逐年增長(zhǎng)的趨勢(shì)。因此對(duì)十足目虹彩病毒1型的快速準(zhǔn)確鑒定有重要意義。本公司根據(jù)獨(dú)自開(kāi)發(fā)的探針?lè)↙MAP技術(shù)，開(kāi)發(fā)了簡(jiǎn)單快捷的十足目虹彩病毒1型探針?lè)↙AMP檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供DNA樣品。
2. 恒溫?cái)U(kuò)增，反應(yīng)設(shè)置更加簡(jiǎn)單。
3. 含熒光探針，可以對(duì)擴(kuò)增進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)（需要熒光PCR儀）。
4. 檢測(cè)靈敏性一般比PCR高10倍以上。
5. 特異性高，根據(jù)十足目虹彩病毒1型保守序列設(shè)計(jì)的4條特異引物和1條探針，不會(huì)跟其他生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
6. 一般30分鐘內(nèi)出結(jié)果，比PCR快。
7. 上樣量大，對(duì)20 μL的反應(yīng)體系，樣品加樣量高達(dá)到14 μL。
8. 內(nèi)含的dUTP-UNG可防交叉污染。
9. 提供無(wú)傳染性的陽(yáng)性對(duì)照，便于分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
10. 提供內(nèi)參，便于排除假陰性結(jié)果。
11. 本產(chǎn)品只能用于定性分析，不推薦用于定量分析。
12. 本產(chǎn)品足夠50次20 μL體系的探針?lè)↙AMP擴(kuò)增。
13. 本產(chǎn)品只可用于科研。
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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4×LAMP MasterMix（探針?lè)ǎ用福?/span> |
200μL |
0.5mL綠蓋管 |
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Bst DNA聚合酶2.0 |
50μL |
0.5mL紅蓋管 |
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20×十足目虹彩病毒1型探針?lè)↙AMP引物-探針混合干粉 |
50μL |
0.5mL棕蓋管 |
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十足目虹彩病毒1型LAMP陽(yáng)性對(duì)照(1×10E4拷貝/mL) |
250μL |
0.5mL黃蓋管 |
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十足目虹彩病毒1型LAMP內(nèi)參對(duì)照(1×10E4拷貝/mL) |
250μL |
0.5mL紫蓋管 |
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使用手冊(cè) |
1份 |
無(wú) |
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本產(chǎn)品采購(gòu)五孔盒包裝 |
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注 意：引物探針混合干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入55 μL的超純水充分混勻和再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
樣品DNA的制備
樣品DNA的制備
1. 用自選方法純化樣品DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)DNA提取試劑盒兼容，包括本公司的免提取的核酸釋放劑。
2. 如果有N個(gè)樣品，則需要做N+2個(gè)樣品制備，包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì)照（PC）和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照（NC）。PC用10 mL本試劑盒提供的樣品陽(yáng)性對(duì)照（1×10E4拷貝/mL）和10 mL內(nèi)參陽(yáng)性對(duì)照（1×10E4拷貝/mL）加一定量的水作為核酸提取陽(yáng)性對(duì)照樣品，加水后的總體積必須跟核酸純化試劑盒所要求的起始樣本體積一致。NC用10 mL本試劑盒提供的10 mL內(nèi)參陽(yáng)性對(duì)照（1×10E4拷貝/mL）加一定量的水充當(dāng)，加水后的總體積必須跟核酸純化試劑盒所要求的起始樣本體積一致。
探針?lè)↙AMP反應(yīng)20 mL體系
3. 反應(yīng)設(shè)置：如果有N+2個(gè)DNA純化樣品，則設(shè)置N+4個(gè)LAMP擴(kuò)增，增加的兩個(gè)反應(yīng)分別是LAMP擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照和LAMP擴(kuò)增陰性對(duì)照。首次使用本試劑盒時(shí)，需要將Bst DNA聚合酶2.0全部加入到4×LAMP MasterMix（探針?lè)?，待加酶）中，輕柔顛倒混勻1分鐘后再使用。未用完的部分需要放-20℃保存。
4. 如果使用熒光定量PCR儀，則設(shè)置60次循環(huán)，每次65℃保溫1分鐘，采集FAM通道和HEX通道的熒光信號(hào)。
結(jié)果分析
1. 實(shí)驗(yàn)有效性的判斷：樣品制備陽(yáng)性對(duì)照和LAMP陽(yáng)性對(duì)照的FAM信號(hào)（對(duì)應(yīng)樣本）和HEX信號(hào)（對(duì)應(yīng)內(nèi)參）必須有標(biāo)準(zhǔn)的S擴(kuò)增曲線，樣品制備陰性對(duì)照的HEX信號(hào)（對(duì)應(yīng)內(nèi)參）必須有標(biāo)準(zhǔn)的S擴(kuò)增曲線，LAMP陰性對(duì)照的FAM信號(hào)和HEX信號(hào)必須呈現(xiàn)一條平線，沒(méi)有S曲線，否則提取實(shí)驗(yàn)或擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)無(wú)效。如果上述陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照結(jié)果正常，則實(shí)驗(yàn)有效，可以分析樣品的情況。
待測(cè)樣品的結(jié)果判斷：在實(shí)驗(yàn)有效的情況下，才有必要分析代測(cè)樣品管的熒光信號(hào)。如果其FAM
2. 熒光信號(hào)曲線為S型（無(wú)論HEX信號(hào)如何），則說(shuō)明樣品為陽(yáng)性。如果FAM熒光信號(hào)為平線則說(shuō)明待測(cè)樣品為陰性。如果HEX熒光信號(hào)為S曲線，說(shuō)明代測(cè)樣品（FAM曲線）為真陰性。如果HEX熒光信號(hào)也是平線，說(shuō)明此樣品可能是假陰性，此樣品需要重復(fù)測(cè)試
自備試劑
樣品DNA，超純水
樣品DNA，超純水
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
