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產(chǎn)品及特點
本試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有牛亞科動物和羊亞科動物的成分?，F(xiàn)代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性，因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無法對食材的真?zhèn)芜M行準確的鑒定。此外還有很多情況需要檢測非食品樣本中是否有牛亞科動物和羊亞科動物源性成分。本產(chǎn)品就是為滿足這些需求根據(jù)PCR原理開發(fā)的產(chǎn)品，它具有下列特點：
本試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有牛亞科動物和羊亞科動物的成分?，F(xiàn)代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性，因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無法對食材的真?zhèn)芜M行準確的鑒定。此外還有很多情況需要檢測非食品樣本中是否有牛亞科動物和羊亞科動物源性成分。本產(chǎn)品就是為滿足這些需求根據(jù)PCR原理開發(fā)的產(chǎn)品，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏度高，可以達到100拷貝/反應(yīng)。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)小麥蜜穗病菌DNA高度保守區(qū)設(shè)計，不會跟其他生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。定量檢測時線性范圍至少為5個數(shù)量級。
6. 本產(chǎn)品足夠50次20 μL體系的探針法qPCR反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色管 |
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熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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牛亞科和羊亞科動物源性成分雙重qPCR引物-探針干粉 |
50次 |
1.5mL棕色管 |
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牛亞科動物源性成分PCR陽性對照(1E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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羊亞科動物源性成分PCR陽性對照(1E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL白蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
無 |
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
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注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入220 mL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀釋牛亞科動物源性成分檢測標準曲線樣品以陽性對照1E1-1E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。
稀釋牛亞科動物源性成分檢測標準曲線樣品以陽性對照1E1-1E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。
1. 標記6個離心管，分別為A6、A5、A4、A3、A2、A1。
2. 在A1-A6號管中各加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液。
3. 在A6號管中加入5 μL 1E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1E6拷貝/μL的標準曲線PC樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在A5號管中加入5 μL 1E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在A4號管中加入5 μL 1E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作得到A1-A6共六個稀釋度的標準曲線陽性樣品。放冰上待用。
稀釋羊亞科動物源性成分檢測標準曲線樣品
7. 操作同上，只是使用羊亞科動物源性成分的PC作為模板。得到6個濃度的樣本放冰上待用，分別是B1-B6。
樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，設(shè)置N+3個提取，多出的一個是牛亞科動物源性成分的PC（牛樣品制備陽性對照），一個是羊亞科動物源性成分的PC（羊樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用確認是牛亞科動物的材料作為牛PC，可以用確認是羊亞科動物的材料作為羊PC，用確認是非牛亞科動物和非羊亞科動物的材料（或水）為NC。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)樣品DNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
Probe qPCR反應(yīng)20 μL體系，在樣品制備室進行
10. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標記N+3+1+6+6個PCR管，其中N+3個用于上步得到的N+3個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），6個用于牛亞科動物源性成分的標準曲線，另外6個用于羊亞科動物源性成分的標準曲線。如果做定性分析并且只做1次重復(fù)，則標記N+3+3個PCR管，其中N+3個用于上步得到的N+3個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于牛亞科動物源性成分PCR陽性對照，1個用于羊亞科動物源性成分PCR陽性對照（直接用第一步和第二步所得的兩個4號稀釋液分別作為模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
數(shù)據(jù)處理
1. 如果擴增陽性對照或制備陽性對照結(jié)果為陰性，則整個擴增或制備實驗無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要重做擴增或制備或跟廠家聯(lián)系。如果擴增陰性對照或制備陰性對照結(jié)果為陽性，說明環(huán)境污染，則整個擴增或制備實驗無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要跟廠家聯(lián)系，購買新的引物和探針。
2. 如果陰性對照和陽性對照正常，則實驗有效，可以進入后續(xù)分析。
3. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，分別以陽性對照（FAM通道）和（Cy5通道）的Ct值為縱軸，繪制標準曲線，陽性對照的標準曲線為斜線，r2必須大于0.95。再以待測樣品的Ct值從陽性對照的標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
4. 對定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照的Ct必須大于40，或者沒有Ct值。陽性對照的熒光信號必須有對數(shù)增長，有典型擴增曲線，Ct值應(yīng)該小于40。對待測樣品，如果其FAM通道的Ct大于40則為牛亞科源動物性成分陰性，如果小于或等于40則為牛亞科動物源性成分陽性。如果其Cy5通道的Ct大于40則為羊亞科動物源性成分陰性，如果小于或等于40則為羊亞科源動物性成分陽性。
自備試劑
超純水，樣品DNA
超純水，樣品DNA
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運輸，-20℃保存，有效期1年
