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菊歐文氏菌玉米致病變種(Erwinia chrysanthemi pv. zeae)是一種革蘭氏陰性細(xì)菌，能游動(dòng)，不形成孢子。菊歐文氏菌玉米致病變種屬于腸桿菌科歐文氏菌屬，主要引起玉米細(xì)菌性莖基腐病。該病菌可能在土壤中病殘?bào)w上越冬，翌年從植株的氣孔或傷口侵入，主要為害中部莖稈和葉鞘。玉米莖基部出現(xiàn)水漬狀腐爛。玉米莖基部出現(xiàn)“水漬狀”圓形或者橢圓形病斑，隨著病害加重，病斑呈現(xiàn)黑褐色不規(guī)則狀。病菌侵染莖稈、心葉等部位，造成生長(zhǎng)點(diǎn)壞死，玉米葉片呈現(xiàn)“萎蔫”狀，同時(shí)因玉米莖稈開(kāi)裂導(dǎo)致發(fā)病植株倒伏。該病菌對(duì)玉米的生長(zhǎng)危害極其嚴(yán)重，因此快速檢測(cè)菊歐文氏菌玉米致病變種具有重要的意義。為此，本公司以探針?lè)╭PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)了菊歐文氏菌玉米致病變種的檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色管 |
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熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL藍(lán)蓋管 |
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菊歐文氏菌玉米致病變種qPCR引物-探針干粉 |
50次 |
0.5mL棕色管 |
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菊歐文氏菌玉米致病變種qPCR陽(yáng)性對(duì)照(1E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊(cè) |
1份 |
無(wú) |
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
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注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入165 μL的超純水充分混勻后得到引物-探針混合液再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6、5、4、3、2、1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。
3. 在6號(hào)管中加入5 μL 1E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1E6拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號(hào)管中加入5 μL 1E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。樣品DNA的制備
7. 如果有N個(gè)樣品，設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0 μL上步所得第4號(hào)稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次樣本制備所要求的起始樣本體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)DNA提取試劑盒兼容，也可以選購(gòu)本公司的免提取核酸釋放劑。
數(shù)據(jù)處理
樣品DNA，超純水，核酸純化試劑盒
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
