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人CYP3A41G基因25343GT點(diǎn)突變探針?lè)╭PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
CYP酶是體內(nèi)重要的藥物代謝酶，分為CYP1, 2, 3等家族，然后分別分為A, B, C等亞家族，末尾再接一個(gè)數(shù)值表示具體的亞型的酶，如CYP3A4是CYP3A亞家族中的重要一員，其活性在人類肝臟中占總CYP活性的60％，同時(shí)其在人體十二指腸、空腸和回腸中均有表達(dá)。CYP3A4*1G是目前已發(fā)現(xiàn)的中國(guó)人所有的CYP3A4單核苷酸多態(tài)性中發(fā)生頻率高的一個(gè)位點(diǎn)，是具有功能意義的突變。研究顯示該基因多態(tài)性可能影響CYP3A4酶活性。因此研究25343G>T突變具有重要的研究意義，為此本公司開發(fā)了專門檢測(cè)25343G>T突變的探針?lè)╭PCR檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
產(chǎn)品及特點(diǎn)
CYP酶是體內(nèi)重要的藥物代謝酶，分為CYP1, 2, 3等家族，然后分別分為A, B, C等亞家族，末尾再接一個(gè)數(shù)值表示具體的亞型的酶，如CYP3A4是CYP3A亞家族中的重要一員，其活性在人類肝臟中占總CYP活性的60％，同時(shí)其在人體十二指腸、空腸和回腸中均有表達(dá)。CYP3A4*1G是目前已發(fā)現(xiàn)的中國(guó)人所有的CYP3A4單核苷酸多態(tài)性中發(fā)生頻率高的一個(gè)位點(diǎn)，是具有功能意義的突變。研究顯示該基因多態(tài)性可能影響CYP3A4酶活性。因此研究25343G>T突變具有重要的研究意義，為此本公司開發(fā)了專門檢測(cè)25343G>T突變的探針?lè)╭PCR檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到1000拷貝/μL。
3. 分辨率高，能檢測(cè)出5%的點(diǎn)突變。
4. 一管式檢測(cè)，野生型探針用FAM標(biāo)記，突變型探針用HEX標(biāo)記。
5. 同時(shí)提供野生型和突變型兩種陽(yáng)性對(duì)照，便于排除假陰性樣品。
6. 特異性高，引物和探針是根據(jù)人CYP3A4*1G基因25343G>T突變?cè)O(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他突變發(fā)生交叉反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能定性，不能定量。
8. 本產(chǎn)品足夠50次20 μL體系的點(diǎn)突變探針?lè)晒舛縋CR反應(yīng)。
9. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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2×點(diǎn)突變Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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人CYP3A4*1G基因25343G>T位點(diǎn)檢測(cè)引物-探針混合液干粉 |
50次 |
0.5mL白蓋管 |
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人CYP3A4*1G基因野生型陽(yáng)性對(duì)照(1×10E4拷貝/μL) |
250μL |
1.5mL棕色管 |
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人CYP3A4*1G基因25343位點(diǎn)突變型陽(yáng)性對(duì)照(1×10E4拷貝/μL) |
250μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊(cè) |
1份 |
無(wú) |
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
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注 意：使用前需要在引物探針干粉管中加入160 μL的自備超純水，震蕩混勻后再取用一次沒(méi)用完剩下的需要放-20℃保存。 |
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使用方法
樣品DNA的制備
樣品DNA的制備
1. 如果有N個(gè)樣品，則進(jìn)行N次純化，得到的DNA溶解在TE中，并需要用NanoDrop進(jìn)行定量。濃度不能低于0.2 μg/μL。
2. 本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)樣品DNA提取試劑盒兼容。
點(diǎn)突變Probe qPCR反應(yīng)20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行
3. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+3個(gè)PCR管，其中N個(gè)用于上步得到的N樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板，NC），3個(gè)用于陽(yáng)性對(duì)照（PC）。
數(shù)據(jù)處理
1. 實(shí)驗(yàn)有效性的判斷：首先分析擴(kuò)增NC是否有FAM或/和HEX信號(hào)，如果有則表示實(shí)驗(yàn)污染，本次實(shí)驗(yàn)無(wú)效，無(wú)需分析所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，需要尋找原因。如果無(wú)則表示實(shí)驗(yàn)沒(méi)有污染，再分析三個(gè)PC。如果野生型PC沒(méi)有FAM擴(kuò)增信號(hào)（有標(biāo)準(zhǔn)的倒S擴(kuò)增曲線，下同），或突變型PC沒(méi)有HEX擴(kuò)增信號(hào)，或雜合型PC沒(méi)有FAM和HEX擴(kuò)增信號(hào)，則表示實(shí)驗(yàn)無(wú)效，不需要分析樣本的數(shù)據(jù)，需要分析原因。如果三個(gè)PC正常（野生型PC有FAM擴(kuò)增信號(hào)，突變型PC有HEX擴(kuò)增信號(hào)，雜合型PC有FAM和HEX擴(kuò)增信號(hào)），則實(shí)驗(yàn)有效，可以分析樣本的數(shù)據(jù)。
2. 如果熒光定量PCR儀有基因分型的自動(dòng)分析模塊，則進(jìn)入該模塊，獲得每個(gè)樣本的HEX值/FAM值的熒光比值，并根據(jù)熒光比值描出散點(diǎn)圖。熒光比值位于散點(diǎn)圖的X軸方向的樣本可以判為突變型，熒光比值將位于Y軸方向的樣本可以判為野生型，熒光比值位于X軸和Y軸中間的可以判為雜合子。擴(kuò)增NC的熒光比值將位于原點(diǎn)附近。散點(diǎn)圖的示例如下：
3. 如果熒光定量PCR儀沒(méi)有基因分型的自動(dòng)分析模塊，則需要手動(dòng)分析。首先根據(jù)Ct值判斷每個(gè)樣本在FAM和HEX兩個(gè)通道的擴(kuò)增情況。如果FAM通道的Ct低于35，則算FAM信號(hào)有擴(kuò)增。如果Ct大于35或沒(méi)有Ct，則算FAM通道無(wú)擴(kuò)增。
自備試劑
樣品DNA
樣品DNA
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
