產(chǎn)品及特點
禽流感病毒（Influenza A Virus）即甲型流感病毒，屬單股負鏈RNA病毒。
該病毒感染禽類且容易在鳥類間流行，過去在民間稱為“雞瘟”，國際獸疫局將其定為甲類傳染病，其中H5和H7型為高致病性毒株可造成急性禽流感。又稱歐洲雞瘟，主要發(fā)生于雞和火雞，常突然爆發(fā)，無先兆癥狀就突然死亡，死亡率50%～100%。新城疫病毒(Newcastle Disease Virus，NDV）屬單股負鏈RNA病毒。該病毒主要危害雞、珠雞和火雞，在被侵襲的雞群中迅速傳播，強毒株可使雞群全群毀滅。弱毒株僅引起雞群呼吸道感染和產(chǎn)蛋量下降，但可迅速康復(fù)。禽流感病毒H5、H7型及新城疫病毒嚴重影響禽類健康造成養(yǎng)殖業(yè)的損失，因此快速檢測禽流感病毒H5、H7型及新城疫病毒具有重要的意義。本產(chǎn)品就是以探針法qRT-PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的同時檢測禽流感病毒H5、H7型及新城疫病毒的試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達到100拷貝/反應(yīng)。
3. 提供陽性對照，便于排除假陰性結(jié)果。
4. 特異性高，引物和探針分別根據(jù)禽流感病毒RNA H5型、H7型以及新城疫病毒RNA高度保守區(qū)設(shè)計，不會跟其他生物的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為4個數(shù)量級。
6. 禽流感病毒H5型、H7型及新城疫病毒分別用FAM、ROX和HEX標記的三個探針檢測。
7. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法RT-PCR反應(yīng)。
8. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
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成分
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規(guī)格
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包裝
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探針法qRT-PCR緩沖液
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500μL
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0.5mL藍蓋管
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探針法qRT-PCR酶混合液v2
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50μL
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0.5mL紅蓋管
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熒光PCR專用模板稀釋液
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1mL
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1.5mL綠蓋管
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流感病毒H5/H7型及新城疫病毒三重RT-PCR引物-探針干粉
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50次
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0.5mL棕色管
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禽流感病毒H5型陽性對照（1×10E7拷貝/μL
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50μL
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0.5mL棕色管
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禽流感病毒H7型陽性對照（1×10E7拷貝/μL）
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50μL
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0.5mL棕色管
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新城疫病毒陽性對照（1×10E7拷貝/μL）
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50μL
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0.5mL黃蓋管
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使用手冊
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1份
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無
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本產(chǎn)品采用十孔盒包裝
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注 意：在使用前需要短暫離心引物-探針干粉管，然后在離心管中加入220uL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。
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使用方法
稀釋禽流感病毒H5型標準曲線樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管，分別為6，5，4，3，2，1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。
3. 在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
稀釋禽流感病毒H7型檢測標準曲線樣品
7. 操作同上，只是使用試劑盒提供禽流感病毒H7型陽性對照作為模板。得到6個濃度的樣本放冰上待用，分別是B1-B6。
稀釋新城疫病毒檢測標準曲線樣品
8. 操作同上，只是使用試劑盒新城疫病毒陽性對照作為模板。得到6個濃度的樣本放冰上待用，分別是C1-C6。
樣品RNA的制備
9. 如果有N個樣品，設(shè)置N+4個提取，多出的3個是禽流感病毒H5型/H7型及新城疫病毒的PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂米詡涞摹⒋_定是陽性的樣本作為樣品制備陽性對照，可以用自備的、確定是陰性的樣本作為樣品制備陰性對照，可以用水替代。
10. 用自選方法純化樣品的RNA（含內(nèi)參），本試劑盒跟市場上大多數(shù)RNA提取試劑盒兼容。
數(shù)據(jù)處理
1. 如果所有標曲擴增或制備陽性對照結(jié)果為陰性，則整個擴增或制備實驗無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要重做擴增或制備或跟廠家聯(lián)系。如果擴增陰性對照或制備陰性對照結(jié)果為陽性，說明環(huán)境污染，則整個擴增或制備實驗無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要跟廠家聯(lián)系，購買新的引物和探針。
2. 如果陰性對照和陽性對照正常，則實驗有效，可以進入后續(xù)分析。
3. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，分別以陽性對照（FAM通道、HEX通道和ROX通道）的Ct值為縱軸，繪制標準曲線，陽性對照的標準曲線為斜線，r2必須大于0.95。再以待測樣品的Ct值從陽性對照的標準曲線上推算出樣品RNA濃度的log值，再推算出其濃度。
4. 對定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照FAM、ROX及HEX通道的Ct必須大于或等于40。禽流感病毒H5型陽性對照FAM通道的熒光信號必須有對數(shù)增長，有典型擴增曲線，Ct值應(yīng)該小于或等于35。對待測樣品，如果其FAM通道的Ct大于或等于40則為禽流感病毒H5型陰性，如果小于或等于35則為禽流感病毒H5型陽性。禽流感病毒H7型陽性對照ROX通道的熒光信號必須有對數(shù)增長，有典型擴增曲線，Ct值應(yīng)該小于或等于35。對待測樣品，如果其ROX通道的Ct大于或等于40則為禽流感病毒H7型陰性，如果小于或等于35則為禽流感病毒H7型陽性。新城疫病毒陽性對照HEX通道的熒光信號必須有對數(shù)增長，有典型擴增曲線，Ct值應(yīng)該小于或等于35。對待測樣品，如果其HEX通道的Ct大于或等于40則為新城疫病毒陰性，如果小于或等于35則為新城疫病毒陽性。
自備試劑
樣品RNA
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期1年
購物車
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