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021-54845833/15800441009
葉酸(FA)ELISA試劑盒
簡介
葉酸屬于水溶性維生素，別稱維生素B9，起先在肝臟中分離出來，因其在植物綠葉中含量十分豐富，后被命名為葉酸。它是一碳單位的主要供體，是細(xì)胞DNA合成過程中的重要輔酶，參與合成氨基酸及核酸，在細(xì)胞復(fù)制分裂、組織分化等方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。人類胚胎神經(jīng)管閉合的時(shí)間為受孕后第21天至28天，這段時(shí)間內(nèi)如果母體葉酸缺乏，胎兒神經(jīng)管閉合可能會出現(xiàn)障礙，致使不良結(jié)局如無腦兒、腦膨出、脊柱裂等的發(fā)生。
葉酸缺乏也會導(dǎo)致DNA合成受到阻礙，骨髓幼紅細(xì)胞合成的DNA會減少，致使細(xì)胞核成熟以及分裂緩慢，細(xì)胞分裂速度遲緩，核漿發(fā)育失衡，細(xì)胞體積增大，發(fā)生巨幼細(xì)胞貧血。低葉酸水平還可引起同型半胱氨酸升高，使動脈硬化、血栓以及高血壓的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加，同型半胱氨酸可引發(fā)胎盤內(nèi)皮細(xì)胞損傷，使胎兒生長受限及母體子癇前期的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加。缺少葉酸還可引發(fā)DNA低甲基化，增加發(fā)生腫瘤的危險(xiǎn)。總之，缺乏葉酸與神經(jīng)管畸形、巨幼細(xì)胞貧血、唇腭裂、腫瘤等疾病有關(guān)，孕期缺乏葉酸還可增加流產(chǎn)、早產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。本酶聯(lián)免疫檢測試劑盒可以經(jīng)濟(jì)、快速地檢測樣本中葉酸的含量。
檢測原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中葉酸和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭葉酸抗體，加入酶標(biāo)二抗后，形成包被抗原-抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物。隨后結(jié)合的酶催化TMB底物顯色，樣本吸光值與其含有的葉酸成負(fù)相關(guān)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可準(zhǔn)確定量樣品中葉酸的含量。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算所得值乘以樣品處理的稀釋倍數(shù)即為實(shí)際樣品中葉酸的含量。
需要的其他材料
1. 酶標(biāo)儀，包含450nm測定波長，同時(shí)包含600-680nm校正波長更佳；
2. 移液器及槍頭；
3. 蒸餾水或去離子水；
4. 100-1000mL刻度量筒；
5. 洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機(jī)；
6. 水平軌道微孔板振蕩器，能夠保持500±50 rpm的速度；
7. 用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的試管。
試劑準(zhǔn)備
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
洗滌液/稀釋液配置
如果洗滌液/稀釋液（20×）有晶體析出，需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋（例如：1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水）
標(biāo)準(zhǔn)品配置
試劑盒中取出標(biāo)準(zhǔn)品，準(zhǔn)備7個(gè)試管，先將100ppm標(biāo)準(zhǔn)品（100μL）按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至360ppb（例：3.6μL的標(biāo)準(zhǔn)品母液+996.4μL的1×稀釋液，制備得到1000μL的360ppb濃度標(biāo)準(zhǔn)品），隨后在5個(gè)試管中分別加入500μL的1×稀釋液，在這5個(gè)單獨(dú)的試管中將360ppb標(biāo)準(zhǔn)品依次2倍倍比稀釋至6個(gè)梯度，共配制6個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，依次為：360 ppb、180ppb、90ppb、45ppb、22.5ppb、11.25ppb、5.63ppb，從最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吸取500μL標(biāo)準(zhǔn)品到下一個(gè)試管中，輕輕吹打混勻，以此類推進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋（如圖所示），1×稀釋液用作零濃度標(biāo)準(zhǔn)品(0ppb)。
一抗工作液配置
使用前10分鐘，用1×稀釋液將100×一抗工作液稀釋成1×一抗工作液，根據(jù)所需用量配置。
酶標(biāo)二抗工作液配置
使用前10分鐘，用1×稀釋液將100×酶標(biāo)二抗稀釋成1×酶標(biāo)抗體工作液，根據(jù)所需用量配置。
備 注：如樣本中待測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值，請根據(jù)實(shí)際情況選擇適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù) (建議：將待測樣本用樣品稀釋液最低稀釋1倍，在正式實(shí)驗(yàn)之前做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定具體稀釋倍數(shù)) ；標(biāo)準(zhǔn)品母液及100×酶標(biāo)二抗溶液根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板孔數(shù)吸取一定量配制工作液，剩余溶液應(yīng)放回-20℃儲存，且避免反復(fù)凍融。（若實(shí)驗(yàn)在1-2周內(nèi)做完，標(biāo)準(zhǔn)品母液及100×酶標(biāo)抗體置于2-8℃保存；若實(shí)驗(yàn)為長時(shí)間跨度實(shí)驗(yàn)，建議將標(biāo)準(zhǔn)品母液及100×酶標(biāo)抗體置于-20℃保存，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性）
結(jié)果的計(jì)算
計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品和樣本復(fù)孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(作圖時(shí)去掉空白組的值)?；蛘呤褂媚軌蛏伤膮?shù)邏輯（4-P）曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件來創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測并在計(jì)算樣本濃度時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
精密度
批內(nèi)精密度 ：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在同一個(gè)板塊內(nèi)精度評估。
批內(nèi)變異系數(shù) CV%小于10%。
批間精密度 ：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在不同板塊內(nèi)精度評估。
批間變異系數(shù) CV%小于15%。
回收率
樣本回收率：80% - 120%
靈敏度
經(jīng)樣本測試，本試劑盒的檢測靈敏度為5.63 ppb。
線性關(guān)系
校準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)r值，大于等于0.9990。
本ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)計(jì)算和曲線圖，請您下載產(chǎn)品說明書(供參考），本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷和治療。
