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021-54845833/15800441009
烏頭堿(ANT)ELISA試劑盒
簡介
烏頭堿（Aconitine）是一種高度復(fù)雜的生物堿，主要來源于烏頭屬植物的根部（如川烏、附子等），烏頭堿的生物活性表現(xiàn)為通過抑制Na+-K+-ATP酶活性，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈉、鉀、鈣離子平衡失調(diào)，影響神經(jīng)遞質(zhì)的正常釋放和傳遞；它還可導(dǎo)致神經(jīng)遞質(zhì)如γ-氨基丁酸（GABA）和谷氨酸（Glu）的異常分泌，進(jìn)一步加劇神經(jīng)毒性。在生物體內(nèi)的代謝途徑主要涉及肝臟和腎臟，烏頭堿首先在肝臟中通過細(xì)胞色素P450酶（CYP450）系統(tǒng)進(jìn)行代謝，主要的代謝酶包括CYP3A4、CYP1A1/2、CYP3A4/5和CYP2D6。這些酶將烏頭堿轉(zhuǎn)化為毒性較低的衍生物，如7-羥基烏頭堿和烏頭堿-3-O-硫酸鹽。本酶聯(lián)免疫檢測試劑盒可以經(jīng)濟(jì)、快速地樣本中的ANT的殘留量。
檢測原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中ANT和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭ANT抗體，加入酶標(biāo)二抗后，形成包被抗原-抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物。隨后結(jié)合的酶催化TMB底物顯色，樣本吸光值與其含有的ANT成負(fù)相關(guān)。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可準(zhǔn)確定量樣品中ANT的含量。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算所得值乘以樣品處理的稀釋倍數(shù)即為實際樣品中ANT的含量。
需要的其他材料
1. 酶標(biāo)儀，450nm/630nm；
2. 移液器及槍頭；
3. 蒸餾水或去離子水；
4. 100-1000 mL刻度量筒；
5. 洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機(jī)；
6. 恒溫培養(yǎng)箱；
7. 振蕩器；
8. 天平（感量0.01g）；
9. 用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的試管；
10. 50mL離心管。
試劑準(zhǔn)備
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
洗滌液/稀釋液配置
如果洗滌液/稀釋液（20×）有晶體析出，需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋（例如：1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水）
標(biāo)準(zhǔn)品配置
試劑盒中取出標(biāo)準(zhǔn)品，準(zhǔn)備7個試管，先將100ppm標(biāo)準(zhǔn)品（100μL）按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至3645 ppb（例：36μL的標(biāo)準(zhǔn)品母液+964μL的1×稀釋液，制備得到1000μL的3645 ppb濃度標(biāo)準(zhǔn)品），隨后在6個試管中分別加入600μL的1×稀釋液，在這6個單獨的試管中將3645 ppb標(biāo)準(zhǔn)品依次3倍倍比稀釋至6個梯度，共配制7個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，依次為：3645ppb、1215ppb、405ppb、135ppb、45ppb、15ppb、5ppb，從最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吸取300μL標(biāo)準(zhǔn)品到下一個試管中，輕輕吹打混勻，以此類推進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋（如圖所示），1×稀釋液用作零濃度標(biāo)準(zhǔn)品(0ppb)。
一抗工作液配置
使用前10分鐘，用1×稀釋液將100×一抗工作液稀釋成1×一抗工作液，根據(jù)所需用量配置。
酶標(biāo)二抗工作液配置
使用前10分鐘，用1×稀釋液將100×酶標(biāo)二抗稀釋成1×酶標(biāo)抗體工作液，根據(jù)所需用量配置。
備 注：如樣本中待測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值，請根據(jù)實際情況選擇適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù) (建議：將待測樣本用樣品稀釋液最低稀釋1倍，在正式實驗之前做預(yù)實驗，以確定具體稀釋倍數(shù)) ；標(biāo)準(zhǔn)品母液及100×酶標(biāo)二抗溶液根據(jù)實驗所需酶標(biāo)板孔數(shù)吸取一定量配制工作液，剩余溶液應(yīng)放回-20℃儲存，且避免反復(fù)凍融。（若實驗在1-2周內(nèi)做完，標(biāo)準(zhǔn)品母液及100×酶標(biāo)抗體置于2-8℃保存；若實驗為長時間跨度實驗，建議將標(biāo)準(zhǔn)品母液及100×酶標(biāo)抗體置于-20℃保存，以保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性）
結(jié)果的計算
計算標(biāo)準(zhǔn)品和樣本復(fù)孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(作圖時去掉空白組的值)?；蛘呤褂媚軌蛏伤膮?shù)邏輯（4-P）曲線擬合的計算機(jī)軟件來創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
精密度
批內(nèi)精密度 ：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在同一個板塊內(nèi)精度評估。
批內(nèi)變異系數(shù) CV%小于10%。
批間精密度 ：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在不同板塊內(nèi)精度評估。
批間變異系數(shù) CV%小于15%。
回收率
樣本回收率：80% - 120%
靈敏度
經(jīng)樣本測試，本試劑盒的檢測靈敏度為5 ppb。
線性關(guān)系
校準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù) r 值，大于等于0.9970。
本ELISA試劑盒實驗計算和曲線圖，請您下載產(chǎn)品說明書(供參考），本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷和治療。
